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實戰(zhàn)分享|小鼠淋巴細胞的提取和分選之經驗小結2023/08/21

脾臟是機體重要的免疫器官之一，含有大量的淋巴細胞，占全身淋巴組織總量的25%，在小鼠中，由于小鼠血液量少，從外周血液中分離大量淋巴細胞較為困難，故經常需要從其脾臟中獲取大量的淋巴細胞。不久前，來自華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院的李老師在Biomaterials雜志上發(fā)布的文章中就用到了上述實驗。以下為是李老師分享的一些相關經驗。操作步驟1材料準備選取具有正常免疫功能的成年小鼠（所需的小鼠數(shù)量根據(jù)實驗需要決定，通常一只小鼠脾臟可提取的淋巴細胞數(shù)量為2~6×107），快速斷頸處死(避免脾梗死)后

原生細胞的合成之經驗分享2023/07/28

近年來，合成生物學的研究如火如荼地開展，其目的在于構建人工分子生物系統(tǒng)并執(zhí)行定制的功能。來自湖南大學的研究團隊使用DNA分子反應網絡封裝在原生細胞中，以此構建了一種可以持續(xù)處理生物環(huán)境中波動生物信息的分子CPU（mCPU），該研究成果發(fā)表于國際期刊ScienceAdvances（IF=14.96）。原生細胞（protocell）的合成是該領域的一大挑戰(zhàn)，下文為此研究團隊中的王老師分享的一些相關經驗。1合成原理“原生細胞的特點是含有微米級大小的空腔和外部的雙層磷脂膜。本論文采用反相微乳液方法制備人

實驗常用人肝癌細胞株(HepG2/Hep3B,HuH-7,MHCC97H,PLC/PRF/5)怎么選？2023/07/03

肝細胞癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）是近年來發(fā)病率急劇上升的惡性腫瘤之一。肝癌細胞系廣泛應用于各類肝癌的研究。肝癌細胞系的基因組與健康人細胞系的基因組不同。常見的人肝癌細胞系有PLC、Huh7、Huh7.5、Hep3B、HepG2、SMMC-7721、MHCC97-H、MHCC9-L等，每一種細胞系都有自己的特點，由于它們具有與原代肝癌細胞相似的生物學特性，無生物學改變、特性穩(wěn)定、無限制傳代，為肝癌研究提供了理想的體外模型，成為除動物實驗外肝癌疾病研究的又一熱門替代

原代細胞的培養(yǎng)方法及注意事項2023/06/29

原代細胞的培養(yǎng)方法及注意事項原代細胞培養(yǎng)，也稱初代培養(yǎng)，是將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖。原代培養(yǎng)的基本過程包括取材、培養(yǎng)材料的制備、接種及培養(yǎng)等步驟，原代培養(yǎng)的方法很多，基本和常用的是組織塊培養(yǎng)法和分離細胞法。1、組織塊培養(yǎng)法基本操作過程1)用培養(yǎng)液濕潤所取組織材料，并用鋒利的眼科剪將附在其上的脂肪和結締組織去除干凈。再用平衡液(PBS)或Hanks液漂洗;用鋒利的

6、24、96孔板接種和換液問題2023/05/31

6、24、96孔板接種和換液問題細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536孔等，孔的底部可以選擇平的、圓的，或錐形的，這取決于細胞類型和下游應用。對于傳統(tǒng)的2D細胞培養(yǎng)(如HeLa或MDCK細胞)，特別是需要對培養(yǎng)物進行成像或分光光度測定，通常選平底(F-bottom)。對于不存在接觸抑制的細胞，弧形底(C-bottom)也不錯。圓底(U-bottom)適合懸浮培養(yǎng)(如球體細胞培養(yǎng))，因為圓的表面讓細胞難以附著和生長。而錐形底很少用于細胞培養(yǎng)實驗，但在細胞沉淀時可能有用

細胞培養(yǎng)板如何選擇2023/05/31

細胞培養(yǎng)板作為培養(yǎng)細胞的一種常用和重要的工具，依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型)；培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536孔等；根據(jù)材質的不同有Terasaki板和普通細胞培養(yǎng)板，形狀、規(guī)格、用途多樣，那么如何選擇適合的培養(yǎng)板?培養(yǎng)板的選擇1.細胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型)不同形狀的培養(yǎng)板有不同用途。培養(yǎng)細胞，通常是選用平底的，這樣便于鏡下觀測、有明確的底面積、細胞培養(yǎng)液面高度相對一致。因此做MTT等實驗時，無論是貼壁和懸浮細胞，一般選用平

貼壁細胞和懸浮細胞的凍存操作步驟及注意事項2023/04/24

當我們需要運輸或者長期不用某種細胞時，通常會使用凍存的方法來保存。若未做好細胞凍存，還會直接影響后續(xù)細胞復蘇狀態(tài)，所以細胞凍存的重要性不容小覷。本期信裕細胞學堂將帶來貼壁細胞和懸浮細胞的凍存操作步驟及注意事項，以便大家查漏補缺。在進行凍存操作前，可預先配置好凍存液；若使用無血清非程序凍存液，則無需自己配制，也無需使用程序降溫盒。01貼壁細胞凍存操作◆將待操作的細胞去上清，用PBS潤洗；◆去上清，加入胰酶消化，消化完成后加入completely培養(yǎng)基終止消化，并吹打均勻制備成細胞懸液；◆1200r

細胞因子的分類和選擇標準2023/04/17

2017年是CAR-T細胞療法的元年，使得越來越多的人開始關注細胞治療領域，包括干細胞治療、TCR-T療法等等。幾乎所有的細胞治療都有一個共同點，即都需要使用細胞因子來誘導細胞增殖或分化。細胞因子雖然在細胞中含量很少，但是種類豐富，并且是作用廣泛，那么，到底什么是細胞因子?細胞因子的作用是什么?怎么選擇合適的細胞因子?我們一起來看看。什么是細胞因子?為了維持機體的生理平衡，抵抗病原微生物的侵襲，防止腫瘤發(fā)生，機體的許多細胞，特別是免疫細胞合成和分泌許多種微量的小分子量可溶性蛋白與多肽類因子，這樣

動物細胞培養(yǎng)的原理及常用培養(yǎng)方式2023/04/10

首先，我們來了解下動物細胞培養(yǎng)什么是動物細胞培養(yǎng)？動物細胞培養(yǎng)，就是從動物有機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞,然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。動物細胞培養(yǎng)的原理動物細胞培養(yǎng)原理是細胞增殖。動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶），放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。細胞培養(yǎng)是指細胞在體外條件下的生長，動物細胞在單獨細胞培養(yǎng)的過程中不再形成個體。體外細胞培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質與體內基本相同，例如，需要糖、氨基酸、無機鹽、促生

趙曉菁：警惕油煙致癌，做頓飯等于抽兩包煙2022/04/26

趙曉菁：警惕油煙致癌，做頓飯等于抽兩包煙目前，中國肺癌發(fā)病率接近發(fā)達國家水平，肺癌已成為惡性腫瘤死亡*原因，其中男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的*位，女性發(fā)病率和死亡率均占第二位。據(jù)統(tǒng)計，我國肺癌發(fā)病率每年增長26.9%，過去30年間，肺癌死亡率上升了465%，預計到2020年，我國肺癌病人將達到80萬，死亡70萬。從事胸外科專業(yè)近二十年，上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院胸外科主任趙曉菁擅長肺、縱隔、氣管等疑難疾病的診斷和手術治療，尤其擅長運用胸腔鏡和縱隔鏡等微創(chuàng)方式診治胸疾病，他所做的微

活久見！銅死亡，登上Science2022/04/12

眾所周zhi，多細胞生物在發(fā)育過程中，存在著多種預定的、受到精確控制的細胞程序性死亡，例如細胞凋亡（Apoptosis）、程序性壞死（Necroptosis）、細胞焦亡（Pyroptosis），以及鐵死亡（Ferroptosis）等。就在近日，2022年3月17日，哈佛-MIT博德研究所的研究人員在國際頂尖學術期刊Science上發(fā)表了題為：CopperinducescelldeathbytargetinglipoylatedTCAcycleproteins的研究論文。ToddGolub團隊從2

【技術分享】細胞活性檢測方法大全2022/03/09

細胞的活性鑒定在生物學和醫(yī)學上具有很重要的意義。它是體外細胞培養(yǎng)技術中常用的一個檢測指標。不同的細胞活性鑒定方法有各自不同具體的反應機理，但無論采用哪種方法，都利用了死細胞和活細胞在生理機能和性質上的差異。常用的方法有直接染色法，克隆形成試驗，比色法等。下面我們就簡單的了解一下常用的細胞活性檢測方法的原理，特點，以及各自的優(yōu)缺點。一、染色計數(shù)法化學染色法染色計數(shù)法是細胞培養(yǎng)中檢查細胞死活zui常用的方法,直接利用死細胞和活細胞對染料的不同親和力,檢查細胞活性,能在光學顯微鏡下觀察到染色結果.可分

上手蛋白定量實驗，我們有招兒2021/12/24

蛋白定量是生物學研究中不可能或缺的一個步驟，根據(jù)其目的可分為蛋白質的“總定量”和特定蛋白的“個別定量”。在蛋白質的提取、純化和分析過程中，蛋白質的定量隨處可見。比如在裂解細胞之后，應對各個樣品中的蛋白進行定量，確保下游實驗的數(shù)據(jù)平行度；在電泳之前進行定量，保證上樣量一致，這樣目的條帶含量的變化才有說服力。蛋白質的結構復雜、功能各一、分子量存在巨大差異，目前還沒有一個理想且通用的蛋白定分析方法。如今最常見的方法主要有以下幾種：BCA法測定bicinchoninincacid01原理BCA(bici

如何選擇合適的蛋白酶抑制劑2021/11/29

即使蛋白酶對細胞功能很重要，但你也有不想見到它們的時候。比如，在純化蛋白質的時候，你可不想讓蛋白酶大肆吞噬你的目標蛋白吧，特別是低豐度蛋白。如今，市場上有多種蛋白酶抑制劑可供選擇，幫助你在必要時停止蛋白酶的活性。為了對付細胞和組織樣品中存在的各種蛋白酶，抑制劑的選擇也在不斷增加。目前，主要有四種類型的蛋白酶，根據(jù)他們活性位點中的氨基酸命名：絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。蛋白酶抑制劑可以特異針對一種蛋白酶，也可以是廣譜的。人們通常根據(jù)抑制劑作用的蛋白酶類型，以及它們可逆

不會感受態(tài)細胞制備的 看過來啦2021/11/29

1.什么是感受態(tài)細胞（1）感受態(tài)細胞其實是一種暫時性改變一下細胞膜的通透性，以利于外源DNA（如質粒）進入細胞。這樣的活細胞稱為感受態(tài)細胞。（2）主要原理其實就是通過特殊的方法處理使細胞，使細胞膜的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現(xiàn)一些孔洞，便于外源DNA（如重組質?；蛘哌\載體）進入感受態(tài)的細胞。2.感受態(tài)細胞制備原理在基因克隆技術中，轉化特指將質粒DNA或以其為載體構建的重組DNA導入細菌體內，使之獲得新的遺傳特性的一種方法。它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領域的基本實驗技術之一

技術指南 | 瓊脂糖凝膠電泳詳解2021/10/26

01電泳的發(fā)展簡史1809國外物理學家Рейсе發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象1909將膠體離子在電場中的移動稱為電泳1937創(chuàng)造了Tiselius電泳儀，建立了研究蛋白質的移動界面電泳方法，并證明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白組成的。1948Wieland和Fischer重新發(fā)展了以濾紙作為支持介質的電泳方法，對氨基酸的分離進行過研究。1950Durrum用紙電泳進行了各種蛋白質的分離以后，開創(chuàng)了利用各種固體物質(如各種濾紙、醋酸纖維素薄膜、瓊脂凝膠、淀粉凝膠等)作為支持介質的區(qū)帶電泳方法。1959Raym

知無不“研“ | ChIP實驗基礎攻略2021/10/14

對一個實驗室新手來講，提到ChIP，您可能沒聽過這個詞，他的全稱叫染色質免疫沉淀(ChromatinImmunoprecipitation),今天就帶大家來學習一下CHIP實驗的相關知識，咱們主要從CHIP的定義、原理、步驟以及應用以下幾點給大家分析介紹，希望能幫助大家更好的做CHIP實驗什么叫ChIP？染色質免疫沉淀（ChIP）用于分析基因組中特定染色體區(qū)域中組蛋白乙?；癄顟B(tài)的實驗方法，被用來研究細胞內DNA與蛋白質相互作用。是目前確定與特定蛋白結合的基因組區(qū)域或確定與特定基因組區(qū)域結合的蛋白

實驗專欄 | 手把手教你質粒DNA提取2021/10/14

上面這張圖，大家有沒有一種熟悉的感覺，沒錯，就是你想的核酸提取實驗流程圖。相信大家作剛開始做為實驗小白，剛進實驗室時，學的第一個實驗就是提質粒了。當時剛進實驗室，看著師兄做實驗的樣子好酷呀！跟在師兄后面，認真的對每一步的步驟都做好筆記，后來才發(fā)現(xiàn)你只不過是做了一份手抄版的說明書。接下來的N年里，除了轉化、涂板、挑單克隆、搖菌、提質粒、酶切、連接，此時此刻，只想有個提取質粒的機器人。因為做多了之后，你就會像個機器人一樣，最后甚至連提取的原理都會遺忘了。所以，今天小編就來給大家講一講提取質粒的原理，

干貨|細胞凋亡檢測方法知多少2021/08/19

一、細胞凋亡的形態(tài)學檢測根據(jù)凋亡細胞固有的形態(tài)特征，人們已經設計了許多不同的細胞凋亡形態(tài)學檢測方法。1光學顯微鏡和倒置顯微鏡2熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡3透射電子顯微鏡觀察二、磷脂酰絲氨酸外翻分析（AnnexinV法）磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine,PS）正常位于細胞膜的內側，但在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中(圖3)。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力特異性結合。將A

Western免疫印跡技術大匯總（上）2021/08/12

各位小伙伴們，我們又見面了好久沒有更新一些技術性的文章了，今天我們就來講講蛋白質技術，對，沒錯，就是Western免疫印跡，這個實驗相信各位小伙伴們，也是耳熟能詳了，但是呢，還是有不少下伙伴們在實驗過程中，會出現(xiàn)各種各樣的問題，所以為了解惑各位小伙伴們，今天我們就出一期關于Western免疫印跡實驗的知識點，其中包括它的概念、原理、應用場景、操作步驟以及注意事項等。Western免疫印跡是什么Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋