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						上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
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            免疫組化實(shí)驗(yàn)沒(méi)有任何著色的解決辦法2024/04/24
            
					
            
				良好的免疫組化染色切片是正確判斷染色結(jié)果的基礎(chǔ)和前提。由于免疫組化染色過(guò)程中存在很多步驟或環(huán)節(jié)，每一個(gè)步驟或環(huán)節(jié)都可能影響到染色的最終結(jié)果，因此，要做好一張高質(zhì)量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事。從染色的結(jié)果看，一般可分為兩類(lèi)：無(wú)色片（即無(wú)陽(yáng)性信號(hào)）和“雜音”染色片（有陽(yáng)性信號(hào)）。一、無(wú)色片染色結(jié)束后，切片中見(jiàn)不到任何陽(yáng)性信號(hào)。這是常規(guī)工作中比較常見(jiàn)的現(xiàn)象，出現(xiàn)這種現(xiàn)象，有兩種可能：1、真陰性結(jié)果：整個(gè)染色過(guò)程沒(méi)有出現(xiàn)問(wèn)題，組織或細(xì)胞確實(shí)不表達(dá)與抗體相關(guān)的抗原。2、假陰性結(jié)果：即此陰性結(jié)果不
					
            
				
            
								
            
					
            單克隆抗體制備原理與詳細(xì)過(guò)程2024/04/23
            
					
            
				單克隆抗體制備的原理：B淋巴細(xì)胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對(duì)這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細(xì)胞的這種能力和量是有限的,不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的、將這種B細(xì)胞與非分泌型的骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞是既具有瘤的無(wú)限生長(zhǎng)的能力，又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即可獲得大量的高效價(jià)、單一的特異性抗體.這種技術(shù)即稱(chēng)為單克隆抗體技術(shù)。單克隆抗體制備的過(guò)程：免疫
					
            
				
            
								
            
					
            抗A、抗B血型定型試劑（單克隆抗體）操作規(guī)程2024/04/22
            
					
            
				【簡(jiǎn)介】抗A,抗B血型定型試劑(單克隆抗體)用A血型單克隆抗體或B血型單克隆抗體配制而成，用于鑒定人ABO血型。單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來(lái)制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無(wú)限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤?！居猛尽勘驹噭┖袃H供鑒定人血型用，具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)?！緶y(cè)定原理】利用單克隆抗A、抗B抗體和相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)
					
            
				
            
								
            
					
            簡(jiǎn)述凝膠層析技術(shù)的原理和過(guò)程2024/04/19
            
					
            
				凝膠層析（又叫凝膠過(guò)濾或分子篩）凝膠層析是指混和物隨流動(dòng)相流經(jīng)固定相的層析柱時(shí)，混合物中各組分按其分子大小不同而被分類(lèi)的技術(shù)。1.原理凝膠層析的固定相是凝膠。凝膠是一種不帶電荷的具有三維空間多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，凝膠的每個(gè)顆粒內(nèi)部都具有很多細(xì)微的小孔，如同篩子一樣。常用凝膠有瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、葡聚糖凝膠等。葡聚糖凝膠介質(zhì)是由多聚葡聚糖與環(huán)氧綠丙烷交連而成。zui常用的葡聚糖凝膠層析介質(zhì)是SephadexG系列，不同型號(hào)的凝膠用G表示，G代表交聯(lián)度，從G10到G100。“G”后面的數(shù)字表示
					
            
				
            
								
            
					
            血清和血漿制備方法說(shuō)明2024/04/18
            
					
            
				血清和血漿均是不含細(xì)胞（包括血小板）等有形成分的血液液體部分，其主要區(qū)別是血清不含凝血因子和血小板，血漿則含有凝血因子，它們的制備方法如下：1、血清的制備：獲得的血液不能抗凝，盛于離心管或可以離心的器皿中，靜置或置37℃環(huán)境中促其凝固，待血液凝固后，將其平衡后離心（一般為3000rpm，離心5～10min），得到的上清液即為血清，可小心將上清吸出（注意切勿吸出細(xì)胞成分），分裝備用。2、血漿制備：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝劑（抗凝劑：血液=1：9，將血液加到一定量后顛倒混勻，離心（離心條件
					
            
				
            
								
            
					
            BCA蛋白濃度測(cè)定方法和注意事項(xiàng)說(shuō)明2024/04/17
            
					
            
				BCA蛋白定量法是一種快速靈敏、穩(wěn)定可靠的蛋白定量測(cè)定方法，其測(cè)定范圍是10－2000ug/ml，是比Lowry法更*的專(zhuān)用于檢測(cè)總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。BCA蛋白定量測(cè)定方法：（96孔板）1、配制BCA工作液:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50體積試劑A，1體積試劑B配制適量BCA工作液，充分混勻。2、將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品按0,1,2,4,6，8,10微升加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加滅菌雙蒸水補(bǔ)足到10微升；取10微升待測(cè)樣品加入96孔板。每個(gè)測(cè)定要做2-3個(gè)平行。3、向帶測(cè)樣品孔和蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入200
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞株生長(zhǎng)過(guò)程容易被影響的原因2024/04/16
            
					
            
				細(xì)胞株在體外進(jìn)行培養(yǎng)，失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制，因此，除滿(mǎn)足營(yíng)養(yǎng)的要求外，還必須使細(xì)胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境。外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。一、溫度：一般哺乳類(lèi)及禽類(lèi)細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃。溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng)。細(xì)胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強(qiáng)，在低溫下，細(xì)胞的代謝活力及核分裂降低。溫度低于0℃時(shí)，雖影響細(xì)胞代謝，但并無(wú)傷害作用。把細(xì)胞置于23~25℃時(shí)，細(xì)胞仍能生存和生長(zhǎng)，但速度減緩，不過(guò)，魚(yú)類(lèi)細(xì)胞的適宜培養(yǎng)溫度為23~25℃。若溫度過(guò)
					
            
				
            
								
            
					
            原代細(xì)胞VS細(xì)胞株那種更適合做實(shí)驗(yàn)2024/04/15
            
					
            
				細(xì)胞實(shí)驗(yàn)主要包括細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞凋亡和增殖、細(xì)胞遷移和侵襲、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和蛋白質(zhì)表達(dá)等內(nèi)容。這些實(shí)驗(yàn)方法的應(yīng)用可以幫助科學(xué)家們深入了解細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，推動(dòng)生命科學(xué)的發(fā)展。原代細(xì)胞：從體內(nèi)直接分離的細(xì)胞。功能、代謝、形態(tài)類(lèi)似體內(nèi)細(xì)胞的特點(diǎn)，因此原代細(xì)胞適用于分析單個(gè)細(xì)胞形態(tài)、代謝、功能。原代細(xì)胞的缺點(diǎn)是：細(xì)胞均一性差，因?yàn)閺奶囟ńM織取下來(lái)的原代細(xì)胞可能處于不同的發(fā)育時(shí)期。增殖能力差、培養(yǎng)時(shí)間受限、轉(zhuǎn)染效率低。細(xì)胞株：原代細(xì)胞經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期培養(yǎng)和篩選后，功能、代謝、形態(tài)趨于均一化的無(wú)限增殖細(xì)胞。適用于整體
					
            
				
            
								
            
					
            酸堿緩沖溶液的類(lèi)型及選擇標(biāo)準(zhǔn)2024/04/12
            
					
            
				酸堿緩沖溶液有三種類(lèi)型：1、弱酸和它的鹽（如：HAc---NaAc）的水溶液組成；2、弱堿和它的鹽（如：NH3·H2O---NH4Cl）的水溶液組成；3、多元弱酸的酸式鹽及其對(duì)應(yīng)的次級(jí)鹽（如：NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液組成。酸堿緩沖溶液的選型：一般應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行選擇。緩沖酸性可選用堿性緩沖液，緩沖酸性可采用堿性緩沖液。常用作緩沖溶液的酸類(lèi)由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。生化實(shí)驗(yàn)室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴bi妥酸、Tris（三羥甲基氨基甲烷）
					
            
				
            
								
            
					
            淺談細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)及主要組成部分2024/04/11
            
					
            
				一、細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)：細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)是細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、細(xì)胞膜。細(xì)胞分為動(dòng)物細(xì)胞、細(xì)菌和真菌和植物細(xì)胞。細(xì)胞是生物體基本的結(jié)構(gòu)和功能單位。已知除病毒之外的所有生物均由細(xì)胞所組成，但病毒生命活動(dòng)也必須在細(xì)胞中才能體現(xiàn)。動(dòng)物細(xì)胞結(jié)構(gòu)：動(dòng)物細(xì)胞有細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核。動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)包括細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)和細(xì)胞器。動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞器包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線(xiàn)粒體、高爾基體、核糖體、溶酶體、中心體。動(dòng)物細(xì)胞與植物細(xì)胞相比較，具有很多相似的地方，如動(dòng)物細(xì)胞也具有細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等結(jié)構(gòu)。但是動(dòng)物細(xì)胞與植物細(xì)胞又有一些重要的區(qū)
					
            
				
            
								
            
					
            無(wú)血清培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)以及使用方法2024/04/10
            
					
            
				細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）就是從機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。體外細(xì)胞培養(yǎng)最常見(jiàn)的是合成培養(yǎng)基如DMEM,F12,MEM等混合一定比例的牛血清進(jìn)行培養(yǎng)；但是大量使用牛血清制品有許多缺陷，如，動(dòng)物源成分，無(wú)法用于臨床研究；成分復(fù)雜，批間差大，質(zhì)量不穩(wěn)定，重復(fù)性差，影響實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)，而且極易引起交叉污染；所以無(wú)血清培養(yǎng)正在替代有血清培養(yǎng)；無(wú)血清培養(yǎng)基的基本配方:基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)
					
            
				
            
								
            
					
            菌種提純復(fù)壯的四種主要方法介紹2024/04/09
            
					
            
				菌種提純復(fù)壯的幾個(gè)主要方法1、純種分離法通過(guò)純種分離，可將衰退菌種細(xì)胞群體中一部分仍保持原有典型性狀的單細(xì)胞分離出來(lái)，經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)，就可恢復(fù)原菌株的典型性狀。常用的分離純化的方法可歸納成兩類(lèi)：一類(lèi)較粗放，只能達(dá)到“菌落純”的水平，即從種的水平來(lái)說(shuō)是純的。例如采用稀釋平板法、涂布平板法、平板劃線(xiàn)法等方法獲得單菌落。另一類(lèi)是較精細(xì)的單細(xì)胞或單孢子分離方法。它可以達(dá)到“細(xì)胞純”即“菌株純”的水平。后一類(lèi)方法應(yīng)用較廣，種類(lèi)很多，既有簡(jiǎn)單的利用培養(yǎng)皿或凹玻片等作分離室的方法，也有利用復(fù)雜的顯微操縱器的純種分
					
            
				
            
								
            
					
            流式細(xì)胞術(shù)介紹及實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題2024/04/08
            
					
            
				流式細(xì)胞術(shù)廣泛應(yīng)用于細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)分子表達(dá)特征的分析，界定不同種類(lèi)的細(xì)胞群，測(cè)定分離出的亞類(lèi)純度，分析細(xì)胞的大小和總量，它可以同時(shí)分析單個(gè)細(xì)胞的多個(gè)參數(shù)。它主要用于檢測(cè)標(biāo)記在抗體上的熒光強(qiáng)度，這些熒光抗體則可以檢測(cè)與特定細(xì)胞分子結(jié)合的蛋白或配體，如與DNA結(jié)合的溴化丙啶(PI)等。染色步驟包括：將培養(yǎng)的細(xì)胞或組織樣品制成單細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞放入管子或酶標(biāo)板中與熒光標(biāo)記或未標(biāo)記的抗體孵育。之后將細(xì)胞放入流式細(xì)胞儀中進(jìn)行分析。懸浮緩沖液中染色的細(xì)胞樣品通過(guò)流式細(xì)胞儀時(shí)，由于鞘液的作用被限制在液流
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞培養(yǎng)的體內(nèi)、外細(xì)胞的差異和分化2024/04/07
            
					
            
				細(xì)胞培養(yǎng)的體內(nèi)、外細(xì)胞的差異和分化1、差異：細(xì)胞離體后，失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細(xì)胞間的相互影響，生活在缺乏動(dòng)態(tài)平衡相對(duì)穩(wěn)定環(huán)境中，日久天長(zhǎng)，易發(fā)生如下變化：分化現(xiàn)象減弱；形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時(shí)間后衰退死亡；或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性，變成可無(wú)限生長(zhǎng)的連續(xù)細(xì)胞系或惡性細(xì)胞系。因此，培養(yǎng)中的細(xì)胞可視為一種在特定的條件下的細(xì)胞群體，它們既保持著與體內(nèi)細(xì)胞相同的基本結(jié)構(gòu)和功能，也有一些不同于體內(nèi)細(xì)胞的性狀。實(shí)際上從細(xì)胞一旦被置于體外培養(yǎng)后，這種差異就開(kāi)始發(fā)生了。2、分化：細(xì)胞分化（celldiffer
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA實(shí)驗(yàn)細(xì)胞處理方法整理！2024/04/03
            
					
            
				（酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定）是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對(duì)于實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用。利用進(jìn)行檢測(cè)的樣本類(lèi)型包括常見(jiàn)的血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見(jiàn)的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等，這些樣本收集的時(shí)間、處理方法和保存都會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。下面就常見(jiàn)細(xì)胞處理方法的整理，希望對(duì)您有所幫助。細(xì)胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清作為樣本。需要注意的是：因該類(lèi)樣本干擾因素較
					
            
				
            
								
            
					
            HE染色的實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)2024/04/02
            
					
            
				一、實(shí)驗(yàn)步驟：（1）樣品制備：對(duì)于貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，胰酶消化，調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml，滴加于蓋玻片上(置于6孔板中)，培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后，取出細(xì)胞爬片，用PBS洗滌3次。（2）樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。（3）染核：蘇木素染液染色2-3min，自來(lái)水洗滌。（4）分色：鏡下觀察，若細(xì)胞核染色過(guò)深，用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒，自來(lái)水洗滌。（5）染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來(lái)水洗滌。（6）吹干或自然晾干細(xì)胞爬片后，中性樹(shù)膠封片。若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定，則
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞死亡的不同類(lèi)型分析2024/04/01
            
					
            
				細(xì)胞死亡是所有生物的基本過(guò)程，通過(guò)不同的機(jī)制發(fā)生。程序性細(xì)胞死亡的三種主要類(lèi)型是凋亡、焦亡和壞死，每一種途徑都使用復(fù)雜的分子和細(xì)胞機(jī)制。盡管每種途徑都有特定的機(jī)制和結(jié)果，但它們具有共同的組成部分和特征。凋亡（即I型細(xì)胞死亡）是程序性細(xì)胞死亡（PCD）的嚴(yán)格調(diào)控形式，可觸發(fā)細(xì)胞自我毀滅而不受任何外部影響。它是生命的重要組成部分，特別是對(duì)于必須控制細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育和更新以維持體內(nèi)平衡的多細(xì)胞生物而言。凋亡是胚胎正常發(fā)育的關(guān)鍵，典型例子如手指之間的細(xì)胞為了分開(kāi)手指而凋亡。自噬（即II型細(xì)胞死亡）也經(jīng)常
					
            
				
            
								
            
					
            Western blot檢測(cè)的抗體怎么選擇合適的？2024/03/29
            
					
            
				WB免疫印跡法，也稱(chēng)免疫轉(zhuǎn)移技術(shù)IBT(Immunoblotting)，是Towbin將1975年Southern發(fā)明的Soutnernblotting技術(shù)應(yīng)用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫學(xué)檢測(cè)方法。其操作簡(jiǎn)便，主要用于未知蛋白檢測(cè)及抗原組分、抗原決定簇鑒定，同時(shí)也用于未知抗體的檢測(cè)和單抗鑒定等，在生物學(xué)基礎(chǔ)研究和臨床疾病早期診斷和預(yù)后跟蹤分析方面都有應(yīng)用。WB實(shí)驗(yàn)中使用到的有三種抗體：一抗、二抗和內(nèi)參抗體。一抗是唯1針對(duì)目標(biāo)抗原的抗體，可以進(jìn)行制備也可以購(gòu)買(mǎi)現(xiàn)貨，難度系數(shù)較高；二抗直接買(mǎi)就O
					
            
				
            
								
            
					
            抗體和重組蛋白的使用攻略及保存原則2024/03/28
            
					
            
				抗體和重組蛋白無(wú)論是保存還是運(yùn)輸，請(qǐng)避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融，冰晶會(huì)破壞抗體和重組蛋白的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構(gòu)象改變，從而降低抗體的結(jié)合能力，也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度?？贵w和重組蛋白保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體和重組蛋白的活性使用效果，如果保存得當(dāng)，抗體和重組蛋白活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。1.收到抗體和重組蛋白后的操作收到抗體和重組蛋白后（大部分抗體和重組蛋白是溶液態(tài)），請(qǐng)務(wù)必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，再打開(kāi)管蓋進(jìn)行分裝、溶解和保存（如果抗體和重組蛋
					
            
				
            
								
            
					
            PBS緩沖液(溶解保護(hù)試劑)配制標(biāo)準(zhǔn)與使用范圍2024/03/27
            
					
            
				PBS緩沖液是一種廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中的緩沖溶液，它的全稱(chēng)是PhosphateBufferSaline(PB)，中文通常稱(chēng)為"磷酸鹽緩沖鹽溶液"或者"磷酸鹽緩沖生理鹽水"。這種溶液之所以能夠保持穩(wěn)定的pH值，主要得益于其中的磷酸緩沖對(duì)（H2PO4-和HPO42-）。在PBS中，陰離子主要是碳酸氫根離子(HCO3-)，而陽(yáng)離子則是鈉離子(Na+)或鉀離子(K+)。這些離子共同構(gòu)成了一個(gè)穩(wěn)定的酸堿平衡體系，使得PBS能夠在一定的范圍內(nèi)保持穩(wěn)定的pH值。因此，PBS不僅適用于作為培養(yǎng)基的成分之一，
					
            
				
            
							
				
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