NK-92細(xì)胞，ATCC細(xì)胞，培養(yǎng)技術(shù)；NK-92懸浮細(xì)胞  在培養(yǎng)的過程中會(huì)聚團(tuán)  有少量貼壁   但是貼壁很輕微  不需要胰酶消化只要槍頭輕輕吹打即可以從壁上下來?；鄯f細(xì)胞庫引進(jìn)ATCC細(xì)胞庫，狀態(tài)良好，傳代次數(shù)少，提醒各位老師，這個(gè)細(xì)胞確實(shí)難養(yǎng)哦。

NK-92細(xì)胞，ATCC細(xì)胞，培養(yǎng)技術(shù)

 一．產(chǎn)品簡(jiǎn)介

1、產(chǎn)品名稱：NK-92

2、產(chǎn)品規(guī)格：25cm²培養(yǎng)瓶

3、培養(yǎng)基信息：

*培養(yǎng)基：

75%α-MEM( 成分：無核糖核苷、去脫氧核糖核苷， Gbico 貨號(hào)：12561-056）+12.5%熱滅活馬血清+12.5%進(jìn)口FBS+1%P/S+0.2mM 肌醇+0.02mM 葉酸+0.1mM β-Mer+100-200U/ml IL-2

4、 培養(yǎng)條件： 37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

5、凍存條件：α-MEM+40% FBS+10%DMSO

二． 使用方法

1、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：

    取出25cm²培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，放入37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時(shí)或隔夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。然后，用75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，收集瓶?jī)?nèi)液體于50ml離心管中，1000rpm離心5min，棄上清，用6ml*培養(yǎng)基重懸，全部接種到25cm²培養(yǎng)瓶中，再放入37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果離心后細(xì)胞量很多，可以直接1:2分瓶培養(yǎng)。

2、細(xì)胞傳代：

     細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時(shí)，收集瓶?jī)?nèi)液體于15ml離心管中，1000rpm離5min，棄上清，用12ml*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按1:2的比例進(jìn)行接種傳代，接種到25cm²培養(yǎng)瓶中，放入37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2-3天更換培養(yǎng)液。換液的步驟同細(xì)胞NK-92細(xì)胞，ATCC細(xì)胞，培養(yǎng)技術(shù)傳代步驟。

3、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時(shí)，收集瓶?jī)?nèi)液體于15ml離心管中，1000rpm離心5min，棄上清，用適當(dāng)量的凍存液（基礎(chǔ)培養(yǎng)基：FBS：DMSO=5:4:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

2）先將細(xì)胞凍存管放置于4℃ 0.5h，再放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃隔夜，24h后可轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。

4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含有5ml*培養(yǎng)液的15ml離心管中，然后1000rpm/min，離心5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用6ml*培養(yǎng)基重懸，接種到培養(yǎng)瓶中，zui后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

三． 注意事項(xiàng)

1、培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月；

2、在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作；

3、傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)；

4、如果您的實(shí)驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)， 請(qǐng)?jiān)谑盏郊?xì)胞后傳代時(shí)，按細(xì)胞量分種2瓶，使用其中的一瓶細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，其余的細(xì)胞先凍存起來。下次實(shí)驗(yàn)需要時(shí)，再復(fù)蘇；

5、該NK-92細(xì)胞，ATCC細(xì)胞，培養(yǎng)技術(shù)只可用于科研。

6、需要更多信息，請(qǐng)致電： ！