人胚肺二倍體細(xì)胞；HEL-2價(jià)格質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。

人胚肺二倍體細(xì)胞；HEL-2價(jià)格操作步驟：

1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞系來(lái)源于一女性胚胎的肺組織。1986年中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:2傳代；3-4天一次
傳代情況 P17
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

PRMI1640 培養(yǎng)基    100mL
PRMI1640 培養(yǎng)基 ( 含 10% 胎牛血清 )    100mL
Protein A 磁珠    1mL
Protein A 瓊脂糖    1mL
Protein A+G 瓊脂糖    2mL
Protein G 磁珠    1mL
Protein G 瓊脂糖    1mL
PstI    1000U
PVDF 膜，0.45μm，13×20cm    1張
PvuII    1000U
Pyrrolidinedithioca rbamin acid.ammonium salt(NF-kB 抑制劑 / 抗氧化劑 )    5mg
胚胎裂解液    1mL
硼氫化氰鈉    5g
硼酸    500g
偏釩酸鈉    25g
嘌呤霉素干粉    25mgOleanolic Acid （100 mg）Astrantiagenin C|Caryophyllin|Giganteumgenin C|Gledigenin 1|NSC 114945|Oleanoic Acid|Virgaureagenin B； 3β-hydroxy-olean-12-en-28-oic acid
（±）8-HEPE （250 ug）（±）-8-hydroxy-5Z，9E，11Z，14Z，17Z-eicosapentaenoic acid； （±）8-HEPE
9（S）-HETE （100 ug）9S-hydroxy-5Z，7E，11Z，14Z-eicosatetraenoic acid； 9（S）-HETE
FeTMPyP （50 mg）Fe（III）tetrakis （1-methyl-4-pyridyl） porphyrin pentachlorideporphyrin pentachloride； FeTMPyP
Cisplatin （50 mg）CDDP|Cisplatinum|NSC 119875|cis-Diamminedichloroplatinum； （SP-4-2）-diamminedichloro-platinum
Bromosporine （25 mg）ethyl （3-methyl-6-（4-methyl-3-（methylsulfonamido）phenyl）-[1,2,4]triazolo[4,3-b]pyridazin-8-yl）carbamate
Citalopram （hydrobromide） （500 mg）Bonitrile|Lu 10-171|Nitalapram|Prepram； 1-[3-（dimethylamino）propyl]-1-（4-fluorophenyl）-1,3-dihydro-5-isobenzofurancarbonitrile, monohydrobromide
Pyrazolam （5 mg）8-bromo-1-methyl-6-（2-pyridinyl）-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]benzodiazepine
Ivacaftor （5 mg）Kalydeco|VX 770； N-
BAY-85-3934 （1 mg）Molidustat； 1,2-dihydro-2-[6-（4-morpholinyl）-4-pyrimidinyl]-4-（1H-1,2,3-triazol-1-yl）-3H-pyrazol-3-one
YZ9 （5 mg）7-hydroxycoumarin-3-Carboxylic Acid ethyl ester； 7-hydroxy-2-ozo-2H-1-benzopyran-3-carboxylic acid, ethyl ester
嘌呤霉素鹽酸鹽    25mg
平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)因子    5mL
平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)因子 ( 不含血清 )    5mL
蘋果酸脫氫酶    5ku
葡激酶    100μg
葡聚糖    50g
葡聚糖 T-10    10g
葡聚糖 T-2000    10g