人胚肺成纖維細胞；HFL1培養(yǎng)
- 公司名稱 上海研生實業(yè)有限公司
- 品牌 ATCC
- 型號
- 產(chǎn)地 進口/國產(chǎn)
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/4/9 16:06:07
- 訪問次數(shù) 376
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| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
|---|
細胞名稱 人胚肺成纖維細胞；HFL1培養(yǎng)
形態(tài)特性 成纖維細胞樣
品牌 貼壁生長
特征特性 該細胞為穩(wěn)定二倍體細胞。
培養(yǎng)條件 F12K 10%FBS
傳代方法 1:4-1:6，每周換液2-3次
傳代情況 P16
凍存條件 90%FBS+10%DMSO
支原體檢測
STR Amelogenin:X；CSF1PO:10；D13S317:8；D16S539:9,11；D18S51:15；D21S11:31.2,32.2；D3S1358:15,17；D5S818:11,12；D7S820:11；D8S1179:12,14；FGA:21,24；PentaD:9,14；PentaE:21；TH01:6,9；TPOX:8；vWA:16
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
人胚肺成纖維細胞；HFL1培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線
豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)免疫試劑盒phospho-APG4B(Ser309)
豬胰島素樣生長因子2(IGF-2)免疫試劑盒AFAP
豬胰島素樣生長因子1(IGF-1)免疫試劑盒ADORA1
豬胰島素(INS)免疫試劑盒ARSB
豬一氧化氮(NO)免疫試劑盒A2BP1
豬氧還原蛋白過氧化物酶2(PRDX2)免疫試劑盒ADAM17
豬氧化低密度脂蛋白(OxLDL)免疫試劑盒ARNT2
豬血小板衍生生長因子(PDGF)免疫試劑盒ABH8
豬血小板活化因子(PAF)免疫試劑盒ABI3BP
豬血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)免疫試劑盒ARHGAP20
豬血栓素A2(TXA2)免疫試劑盒ASB10
豬血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)免疫試劑盒ALDH1L1
豬血清淀粉樣蛋白A(SAA)免疫試劑盒Axin 2
豬血紅蛋白(Hb)免疫試劑盒AMH
豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)免疫試劑盒EphA8
豬血管舒緩激肽(BK)免疫試劑盒Acetoacetyl-CoA synthetase
豬血管生成素2(ANG-2)免疫試劑盒ARNTL2
豬血管生成素1(ANG-1)免疫試劑盒phospho-AANAT (Thr29)
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