PCⅢ Ⅲ型前膠原(PCⅢ)ELISA 試劑盒
- 公司名稱 上海賽默生物科技發(fā)展有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) PCⅢ
- 產(chǎn)地 進(jìn)口
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/2/20 12:59:47
- 訪問次數(shù) 1728
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Ⅲ型前膠原(PCⅢ)ELISA 試劑盒
酶標(biāo)抗體標(biāo)記效果測定:測定內(nèi)容包括酶和抗體活性、結(jié)合物中酶含量和IgG含量、酶與IgG摩爾比值以及結(jié)合率。
Ⅲ型前膠原(PCⅢ)ELISA 試劑盒
間接法
間接法常用于檢測抗體,一般的操作步驟為:
將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余的抗原。
加入待測檢體,檢體中若含有待測的一次抗體,則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)。
洗去多余待測檢體,加入帶有酶的二次抗體,與待測的一次抗體鍵結(jié)。
洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酶呈色,藉儀器(ELISA reader)測定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗體的含量。
操作程序
1. 分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl;在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混勻,37℃溫育60分鐘。
2. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。
3. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
4. 取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
5. 測定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
6. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。