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            產(chǎn)品展廳

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            鼠尾膠原蛋白I型

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            鼠尾膠原蛋白I型

            鼠尾膠原蛋白I型照片
            • 無塵車間內(nèi)生產(chǎn),保證潔凈度
            • 可用于包被細胞培養(yǎng)器皿(單分子層包被)
            • 也可形成具有一定強度的三維膠用于細胞的三維空間培養(yǎng)
            • 通過細胞培養(yǎng)測試(包括三維膠內(nèi)的細胞培養(yǎng))
            • 電泳結(jié)果和 Sigma 的同類產(chǎn)品無顯著區(qū)別。
            • 產(chǎn)品為無菌的溶液,省去從干粉配制的麻煩。

            包裝規(guī)格

            產(chǎn)品號品牌包裝規(guī)格
            200110-10shengyou10mg, 5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L HAc, 無菌。
            200110-50shengyou50mg, 5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L HAc, 無菌。
            200110-250shengyou250mg, 5mg/ml, 溶解于 0.006mol/L HAc, 無菌。

            產(chǎn)品說明

            杭州欣友生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的鼠尾膠原蛋白 I型(rat tail tendon collagen type I)是通過 Birkedal-Hansen1 的方法,通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、沉淀等步驟制備的。

            shengyou鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿,培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠,模擬真實的生長環(huán)境,使細胞在三維環(huán)境中生長。

            shengyou鼠尾膠原蛋白包被pc-12細胞生長照片

            shengyou鼠尾膠原蛋白包被的
            培養(yǎng)皿中生長的 PC-12 細胞

            shengyou鼠尾膠原蛋白三維膠NIH-3T3細胞生長照片

            shengyou鼠尾膠原蛋白三維膠中
            生長的 NIH-3T3 細胞(接種后 5天)

            shengyou鼠尾膠原蛋白三維膠電泳

            和Sigma鼠尾膠原蛋白(cat# C7661)
            SDS-PAGE 電泳對比。
            A: Sigma B:shengyou

            使用方法

            1、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被 推薦濃度: 1-5ug/cm2

            以包被濃度為 2 ug/cm2 為例:

            用無菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/ml。按表 (一)體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中:

            表面積(cm2 ,每孔或每皿) 加入 0.012mg/ml 膠原的體積 ( ul )
            96孔細胞培養(yǎng)板 0.3 50
            24孔細胞培養(yǎng)板 1.9 300
            12孔細胞培養(yǎng)板 3.8 600
            6孔細胞培養(yǎng)板 9.5 1580
            35mm細胞培養(yǎng)皿 8 1330
            60mm細胞培養(yǎng)皿 21 3500
            100mm細胞培養(yǎng)皿 55 9170

            確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,開蓋在超凈臺上過夜晾干。 也可以在室溫放置 1小時后,用PBS洗3-4次后直接使用。

            包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3個月以上的時間。

            2、三維膠原的制備

            shengyou鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,pH 7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。生友膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。

            需要的溶液 ( 均需要 無菌 、 預(yù)冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水

            A.不含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul shengyou鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10xPBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。

            B.含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞,并放置于冰浴中。將200ul shengyou鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,加入適當(dāng)體積的細胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

            注:鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH中性時可迅速成膠,在操作過程中要盡量保持低溫。

            1 、 Birkedal-Hansen, H. 1987. Catabolism and turnover of collagens: Collagenases. Methods Enzymol. 144 : 140-171.



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