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            產(chǎn)品展廳

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            化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>行業(yè)專用試劑>生物試劑>HG-CA001 CAR/TCR 基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒

            HG-CA001 CAR/TCR 基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒

            參考價(jià) 11800
            訂貨量 ≥1
            具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

            聯(lián)系方式:梁經(jīng)理查看聯(lián)系方式

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            柏萊源(天津)生物科技有限公司主要從事分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑及耗材的銷售,包括核酸提取、PCR產(chǎn)品、血清、細(xì)胞培養(yǎng)耗材等產(chǎn)品。

            我司代理品牌及優(yōu)勢(shì)品牌包含但不限于:sigma、Thermo Fisher、Goldbio、Qiagen、Abcam、ATCC、ECACC、Polysciences、艾本德、天根、Takara、B&D、BIOFLUX、biolegend等。

            柏萊源(天津)生物科技有限公司具備良好的客戶服務(wù)意識(shí)和專業(yè)知識(shí),致力于為科研人員提供系統(tǒng)的售前售后服務(wù)。我們以“秉承科研初心,促進(jìn)產(chǎn)業(yè)新興”為經(jīng)營(yíng)理念,專注于為廣大科研工作者提高技術(shù)成果的轉(zhuǎn)化和研發(fā)水平,不斷提升科研效率我們有足夠的信心去迎接挑戰(zhàn),我們一定會(huì)用專業(yè)的產(chǎn)品知識(shí)和完善的售后服務(wù)來(lái)證明,未來(lái)是屬于我們的!

             

             

             

             

            分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑及耗材的銷售,包括核酸提取、PCR產(chǎn)品、血清、細(xì)胞培養(yǎng)耗材等產(chǎn)品。

            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100 Reactions
            應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

              CAR/TCR  基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒(多重 qPCR- 熒光探針?lè)ǎ?/strong>說(shuō)明書

            貨號(hào): HG-CA001

            CAR/TCR 基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒


            產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

            本試劑盒用于核酸的提取、富集、純化等步驟,其處理后的產(chǎn)物可用于臨床體外檢測(cè)使用。

            本試劑盒使用超順磁性微球可以特異性的吸附 DNA,通過(guò)洗滌去除 DNA 以外的蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA,分離純化得到高質(zhì)量核酸。

            檢測(cè)范圍:3×101 copies/μL~3×106 copies/μL

            規(guī)格:

            100 Reactions

            產(chǎn)品組成:

            組分規(guī)格存儲(chǔ)條件


            CAR 定量參考品(3×108 copies/μL )50μL×1 管-20℃


            CAR Primer&Probe Mix550μL×1 管-20℃


            2× qPCR Reaction Buffer1.2mL×1 管-20℃


            DNA 稀釋液1.5mL×3 管-20℃


            ROX High50μL×1 管-20℃


            ROX Low50μL×1 管-20℃




            產(chǎn)品儲(chǔ)存條件與有限期:

            存儲(chǔ)條件見(jiàn)上表,有效期 18 個(gè)月。

            適用機(jī)型(包括但不限于):

              ◆ ABI PRISM 7500
              ◆ FQD-96A(博日)
              ◆ CFX96(Bio-Rad)
              ◆ Roche Light Cycler 480
              配合不同機(jī)型使用時(shí),請(qǐng)注意選擇適配的參比染料 ROX

              儀器ROX參比染料
              Applied Biosystems®5700,7000,7300,7700,7900HT,StepOneTM,and StepOnePlusTTMROX High
              Applied Biosystems®7500,ViiATM 7,QuantStudioTM12K Flex,Agilent Mx3000PTM,Mx3005PTM,and Mx4000TMROX Low
              Rotor-GeneTM,DNA Engine OpticonTM,OpticonTM2,Chromo 4TMReal-Time Detector,Mastercycler®ep realplex,
              Smart Cycler®,Roche LightCycle®480,Roche LightCycler®Nano,Bio-Rad CFX96,and llumina EcoTM
              No ROX

              需要準(zhǔn)備材料:

              ◆ 1.5mL 或 2mL 無(wú)菌低吸附離心管
              ◆ 離心機(jī)
              ◆ 熒光定量 PCR 儀

              ◆ 與 PCR 儀適配的 96 孔 qPCR 板或八聯(lián)排管
              ◆ 震蕩器
              ◆ 1000μL,200μL,10μL 無(wú)菌低吸附帶濾芯槍頭
              ◆ 各規(guī)格移液器(如 1000μL,200μL,10μL,2.5μL 等)

              操作步驟:

              一、 樣品前處理

              詳見(jiàn)血液 / 組織 / 細(xì)胞基因組 DNA 純化提取試劑盒(貨號(hào)為 HG-NA100)操作說(shuō)明書。

              二、qPCR 操作步驟

              1. 定量參考品及 NTC/NCS 的制備

              1.1 定量參考品:取出 CAR 定量參考品、DNA 稀釋液置于冰上融化;待完i全融化后,輕微振蕩混勻,瞬時(shí)離心;

              1.2 取 7 支干凈的 1.5mL 離心管,分別標(biāo)記為 ST0,ST1,ST2,ST3,ST4,ST5,ST6;

              1.3 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋過(guò)程如下表:

              標(biāo)準(zhǔn)品代號(hào)

              稀釋體積

              濃度(copies/μL)

              STO

              10μL定量參考品+90μL DNA稀釋液

              3×10?

              ST1

              10μL STO+90μL DNA稀釋液

              3×106

              ST2

              10μLST1+90μL DNA稀釋液

              3×10?

              ST3

              10μL ST2+90μL DNA稀釋液

              3×10?

              ST4

              10μL ST3+90μL DNA稀釋液

              3×103

              ST5


              10μL ST4+90μL DNA稀釋液


              3×10
              2

              ST6

              10μL ST5+90μL DNA稀釋液

              3×101

              1.4 NTC 的制備:100uL DNA 稀釋液;

              1.5 NCS 的制備 : 隨樣品取 100μL DNA 稀釋液進(jìn)行樣品預(yù)處理。

              2. q-PCR 反應(yīng)液的制備和加樣














              2.1 根據(jù)所需檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測(cè)樣品數(shù)量(一般做 3 個(gè)復(fù)孔),計(jì)算所需孔數(shù):

                  反應(yīng)孔數(shù) =(6 個(gè)濃度梯度的標(biāo)曲 +2 個(gè)陰性對(duì)照 NTC 和 NCS + 待測(cè)樣品)×3

              2.2 根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計(jì)算本次所需的 qPCR Mix 總量:

                  qPCR Mix =(反應(yīng)孔數(shù) +2 或 3)× 15μL(2 或 3 為操作損失量)

              2.3 將所需試劑置于冰上融化,輕微振蕩混勻,按下表所示配制 qPCR Mix。

              組分單個(gè)反應(yīng)量 (μL)
              2× qPCR Reaction Buffer10
              CAR Primer&Probe Mix4.6
              ROX*0.4
              總體積15
              備注:請(qǐng)對(duì)應(yīng)機(jī)型選擇適配的 ROX;若機(jī)型適配為 no ROX,請(qǐng)加入等體積的去離子水(要求無(wú)核酸及核酸酶污染)。






              3. 將所需試劑置于冰上融化,輕微振蕩混勻,按下表所示加樣(總體積20μL):

              參考品15μL qPCR Mix +5μL ST1/2/3/4/5/6
              陰性對(duì)照15μL qPCR Mix +5μL NTC/NCS
              待測(cè)樣品15μL qPCR Mix +5μL 待測(cè)樣本

              各反應(yīng)孔加樣示例

              4.實(shí)驗(yàn)需使用qPCR實(shí)驗(yàn)專用的八聯(lián)管或者96孔板進(jìn)行反應(yīng),需去除反應(yīng)體系中的氣泡,并離心將液體離至管底準(zhǔn)備反應(yīng)。
              5.反應(yīng)孔排版示例


              123456789101112
              AST1ST1ST1





              S1S1S1
              BST2ST2ST2





              S2S2S2
              CST3ST3ST3





              S3S3S3
              DST4ST4ST4








              EST5ST5ST5








              FST6ST6ST6





              ERC -S1ERC -S1ERC -S1
              G



              NTCNTCNTC

              ERC -S2ERC -S2ERC -S2
              H



              NCSNCSNCS

              ERC -S3ERC -S3ERC -S3











              96孔板排版示例

              三、 qPCR反應(yīng)程序和參數(shù)設(shè)置

              (以BIO-RAD公司CFX96 qPCR儀為例。)

              1.創(chuàng)建實(shí)驗(yàn)反應(yīng)程序,設(shè)置兩步法反應(yīng)程序如下表:

              Stagel預(yù)變性Reps:195℃10min
              Stage2循環(huán)反應(yīng)Reps:4095℃15s
              60℃60s




              2.創(chuàng)建實(shí)驗(yàn)反應(yīng)板,點(diǎn)擊 Select Fluorophores 選擇熒光 FAM 和 Cy5;

              在反應(yīng)板圖表中,選擇樣品孔,在Sample Type中下拉選擇Unknow,勾選熒光FAM,Target Name命名為Human-DNA;輸入每個(gè)樣品的重復(fù)次數(shù)及Sample Name;

              在反應(yīng)板圖表中,選擇標(biāo)曲孔,在 SampleType 中下拉選擇 Standard,勾選熒光 FAM,Target Name 命名為 CAR;勾選熒光 Cy5,Target Name 命名為 RFG,輸入每個(gè)稀釋梯度的重復(fù)次數(shù)及 SampleName。并且分別在 ST1, ST2, ST3,ST4,ST5,ST6 的 Concentration 一欄賦值為 3E+06、3E+05、3E+04、3E+03、3E+02、3E+01( 單位為 copies/uL) 。

              3.點(diǎn)擊 Run 界面“Start Run”按鈕進(jìn)行 PCR 測(cè)定。4.點(diǎn)擊Run界面“Start Run”按鈕進(jìn)行PCR測(cè)定。

              四、 qPCR結(jié)果分析

              以BIO-RAD公司CFX96 qPCR儀為例
              1. 點(diǎn)擊資料分析視窗Quantitation,可讀取標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率(Slope)、截距(Intercept)、擴(kuò)增效率(Effect)、R2
              2. 在視窗Quantitation Data 中,SQ Mean 一欄可讀取無(wú)模板對(duì)照NTC、NCS、待測(cè)樣本的檢測(cè)值,單位為copies/μL。
              3. 數(shù)據(jù)可靠性評(píng)估:
              • 三個(gè)平行孔間Ct值差應(yīng)小于1.0,Ct值大于35的孔除外;
              • 陰性對(duì)照NTC和NCS的CT值都應(yīng)大于標(biāo)曲最i低濃度的CT值或根據(jù)實(shí)驗(yàn)室自身驗(yàn)證結(jié)果設(shè)定標(biāo)準(zhǔn);
              • 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)R2≥0.98,擴(kuò)增效率85%~110%之間;
              • ERC回收率在50%~150%之間(加標(biāo)回收率=ERC/(0.9*樣品+0.1*ST3)。

              4. 結(jié)果計(jì)算:CAR 拷貝數(shù) / 細(xì)胞 = 2 x CAR / RFG

              注意事項(xiàng):

              1. 本試劑盒已通過(guò)穩(wěn)定性(凍融等因素)的驗(yàn)證,無(wú)需分裝。
              2. 陰性樣品和陽(yáng)性樣品(參考品和待測(cè)樣品等)的配制環(huán)境需區(qū)分區(qū)域,不可在一個(gè)區(qū)域內(nèi)操作,配制人員需穿戴整齊,戴
              好口罩、手套和穿好潔凈服。
              3. 注意在不同加樣步驟間及時(shí)更換吸頭,避免交叉污染,避免長(zhǎng)時(shí)開(kāi)蓋。
              4. 試劑盒必須在有效期內(nèi)使用。
              5. 試劑盒內(nèi)所有組分建議在低溫環(huán)境融化后使用。
              6. 只有嚴(yán)格遵守說(shuō)明書的操作方法,全部使用本試劑盒配套的試劑才能保證優(yōu)良檢測(cè)效果。
              7. 盡量在當(dāng)天完成樣本前處理純化后立即進(jìn)行后續(xù)qPCR檢測(cè),以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
              8. 最終的試驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、操作者的操作方法及試驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)。
              9. 公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,
              預(yù)留充足的樣本。
              10. 本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷。

            CAR/TCR 基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品訂購(gòu),請(qǐng)聯(lián)系柏萊源(天津)生物科技有限公司!

            柏萊源(天津)生物科技有限公司的優(yōu)勢(shì):

            現(xiàn)貨供應(yīng):公司庫(kù)存充足,可快速發(fā)貨,減少用戶等待時(shí)間。

            效期保障:嚴(yán)格把控產(chǎn)品質(zhì)量,確保試劑效期新鮮,保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

            專業(yè)技術(shù)支持:提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案和技術(shù)指導(dǎo),幫助用戶優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,提高實(shí)驗(yàn)成功率。

            定制化服務(wù):根據(jù)用戶需求,提供個(gè)性化的產(chǎn)品和服務(wù)解決方案。

            售后保障:完善的售后服務(wù)體系,及時(shí)解決用戶在使用過(guò)程中遇到的問(wèn)題。

            CAR/TCR 基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒:柏萊源(天津)生物科技有限公司,更多產(chǎn)品資訊,請(qǐng)聯(lián)系我們哦!






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