BA6003 超氧化物歧化酶試劑盒 抗逆
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BA6003
- 產地 北京
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2025/3/28 16:00:05
- 訪問次數 29
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| 供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BA6003 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中 |
超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）試劑盒說明書（WST-8 法）
微量法 100 管/96 樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成H2O2 和O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。
測定原理：
通過黃piao呤及黃piao呤氧化酶反應系統(tǒng)產生超氧陰離子(O2-.)，O2-.可與WST-8 反應產生水溶性染料甲臜，后者在 450nm 處有吸收；SOD 可清除O2-.，從而抑制了甲臜的形成；反應液黃色越深，說明SOD 活性愈低，反之活性越高。
組成：
超氧化物歧化酶試劑盒 抗逆
產品名稱 | BA6003-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 20ml | 4℃避光 |
試劑二：液體 | 150μl | 4℃避光 |
試劑三：液體 | 100μl | 4℃ |
試劑四：粉劑 | 2 瓶 | 4℃ |
說明書 | 一份 | |
自備儀器和用品：
酶標儀、離心機、移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水
粗酶液提?。?/span>
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、酶標儀預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 450nm。
2、試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋 50 倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水 1：49 稀釋。
3、工作液配制：在試劑一加入 100μl 試劑二，充分混勻。配好的試劑 4℃避光可保存一周。（若一次性測定樣本較少，可按照實際用量將試劑一和試劑二按照 20ml：0.1ml 的比例混勻配制）
4、將一瓶試劑四用 5ml 蒸餾水溶解（溶解后一周內用完）。
5、樣本測定（在 96 孔板中依次加入下列試劑）
試劑名稱（μl） | 測定管 | 對照管 |
樣本 | 10 | |
蒸餾水 | 10 | |
試劑三（稀釋 后） | 10 | 10 |
工作液 | 160 | 160 |
試劑四 | 20 | 20 |
充分混勻，室溫靜置 30min 后，450nm 處測定各管吸光值 A。
注意事項
1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、SOD 為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數值在什么范圍？
對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低，可以適當減少稀釋倍數；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應時間不夠，可以延長反應時間（反應時間 30min 可以延長到 40min）。對照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管，可能是樣本中雜質的影響太大，為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10 倍后再測，通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
SOD 活性計算：
1、抑制百分率的計算
抑制百分率＝(A 對照管－A 測定管) ÷A 對照管× 100%
盡量使樣本的抑制百分率在 10-90%范圍內。如果計算出來的抑制百分率小于 10%或大于 90%，則通常需要調整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需將樣本用提取液適當稀釋；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度比較高的待測樣本。
2、SOD 酶活性單位：在上述黃piao呤氧化酶藕聯反應體系中抑制百分率為 50%時，反應體系中的 SOD 酶活力定義為一個酶活力單位(U/ml)。
3、SOD 酶活性計算：
（1） 血清（漿）SOD 活性(U/ml)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷V 樣
=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)
（2） 組織、細菌或培養(yǎng)細胞SOD 活力計算：
a. 按樣本蛋白濃度計算
SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷(V 樣×Cpr)
=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司BCA 蛋白質含量測定試劑盒。
b. 按樣本鮮重計算
SOD 活性(U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷(W ×V 樣÷V 樣總)
=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷W c.按細菌或細胞個數計算
SOD 活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率) ×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)
=0.04×抑制百分率÷(1－抑制百分率)
V 反總：反應體系總體積，0.2ml；V 樣：加入反應體系中樣本體積，0.01ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml ；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500 萬。
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