肌酸ji酶（Creatine Kinase, CK）測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

分光光度法 50 管/48 樣

肌酸ji酶測(cè)定試劑盒 輔酶Ⅱ

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心臟、肌肉以及腦等組織中，能可逆地催化肌酸與 ATP 之間的轉(zhuǎn)磷酰基反應(yīng)，在能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮和ATP 再生中有重要作用，是臨床診斷心腦疾病的一個(gè)重要指標(biāo)。

測(cè)定原理：

CK 催化磷酸肌酸和 ADP 生成肌酸和ATP，己糖激酶催化 ATP 與葡萄糖形成 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化 6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH，導(dǎo)致 340nm 光吸收值增加。

組成：

試劑一：粉劑 1 瓶，4℃避光保存，使用前加 15ml 蒸餾水溶解。

工作液：臨用前根據(jù)用量將試劑一和試劑二以 1:1 混合。使用前 37℃溫育 2min。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)、1 ml 石英比色皿和蒸餾水。

粗酶液提取：

組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml

提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 15min，取上清，置冰上待測(cè)。

血清樣本：直接測(cè)定。

測(cè)定步驟：

紫外分光光度計(jì)預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。

在 1 ml 石英比色皿中加入 200μl 樣本和 300μl 蒸餾水，最后加入 500μl 工作液，立即混勻，37℃下測(cè)定初始吸光值A(chǔ)1 與 1min 后的吸光值A(chǔ)2，ΔA＝A2-A1。

CK 活性計(jì)算公式

1、按組織蛋白含量計(jì)算

酶活定義：37℃，pH7.0 時(shí)，每毫克蛋白質(zhì) 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 為一個(gè)酶活單位。

CK 活性（nmol/min / mg prot）=

2、按組織樣本質(zhì)量計(jì)算：

?A?? d

×V 反總÷(V 樣×Cpr)= 804×△A÷Cpr

酶活定義：37℃，pH7.0 時(shí)，每克樣品 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 為一個(gè)酶活單位。

CK 活性（nmol/min /g 鮮重）=

按血清計(jì)算：

?A

?? d

×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= 804×△A÷W

酶活定義：37℃，pH7.0 時(shí)，每升血清 1min 內(nèi)催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 為一個(gè)酶活單位。

CK 活性（nmol/min /L）=

?A

?? d

×V 反總÷V 樣= 804×△A

?：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6220 L /mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積，1ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.2ml；T，反應(yīng)時(shí)間，1min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)

配制好的工作液 4℃穩(wěn)定 7 天，請(qǐng)配制后盡快使用。

血清的CK 不穩(wěn)定，采集樣本后盡快測(cè)定，4℃避光保存可穩(wěn)定 24h。

樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定，可選用BCA 蛋白含量測(cè)定試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

OD 值大于 0.5 可用提取液適當(dāng)稀釋樣品，并在計(jì)算公式中相應(yīng)的改變稀釋倍數(shù)。

肌酸ji酶測(cè)定試劑盒 輔酶Ⅱ