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            BE6016 乙醇脫氫酶活性測定試劑盒 輔酶Ⅰ系列

            具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
            • 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
            • 品牌 NobleRyder/諾博萊德
            • 型號 BE6016
            • 產(chǎn)地
            • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
            • 更新時間 2025/4/4 16:37:31
            • 訪問次數(shù) 52

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            北京諾博萊德科技有限公司始創(chuàng)于2012年,總部位于北京海淀區(qū),專注于科研生物領(lǐng)域,是一家研發(fā)、銷售和服務(wù)于一體的企業(yè)。公司秉承“誠信為本,博采眾長”的發(fā)展理念,致力于為科研工作者提供高質(zhì)量的生物產(chǎn)品和服務(wù)。

            諾博萊德的產(chǎn)品覆蓋面廣泛,包括以下

            生化試劑:抗生素、蛋白質(zhì)、染色劑、培養(yǎng)基、緩沖試劑、對照品、標(biāo)準(zhǔn)品、磁珠;

            即用型試劑:常規(guī)試劑溶液、即用型染色液、免疫學(xué)試劑、細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、檢測試劑盒、細胞分離液人或其他動物細胞;

            通用耗材:移液管/架、吸頭、槍頭、移液器、離心管/盒/架、PCR耗材、濾紙、口罩手套、冷/凍存管/盒、培養(yǎng)板/皿/瓶、蓋/載玻片、刀片、包埋盒/框、封片劑、石蠟、鏡油等產(chǎn)品被國內(nèi)科研工作者廣泛應(yīng)用。

             

            生化試劑,即用型試劑,分子生物學(xué),細胞生物學(xué)

            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T/96S
            貨號 BE6016 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
            主要用途 乙醇脫氫酶(ADH)活性測定試劑盒


            乙醇脫氫酶(ADH)活性測定試劑盒說明書

            微量法 100T/96S

             

            正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義:

            ADH 是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換,在很多生理過程中起著重要作用。哺乳動物ADH 主要在肝臟生成,肝臟損傷導(dǎo)致ADH 釋放到血清中。血清ADH 活性高低反映了肝功能是否異常。

            測定原理:

            ADH 催化NADH 還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH  340nm 處有吸收峰,而 NAD+沒有;測定 340nm吸光度下降速率,來計算ADH 活性。

            乙醇脫氫酶活性測定試劑盒 輔酶Ⅰ系列

            組成:

            產(chǎn)品名稱

            BE6016-100T/96S

            Storage

            試劑一:液體

            1

            室溫

            試劑二:液體

            1

            4℃

            試劑三:粉劑

            2

            -20℃

            試劑四:液體

            1

            4℃

            說明書

            一份

            試劑三:粉劑×2 瓶,-20℃保存,臨用前每瓶加入 9ml 試劑二,現(xiàn)配現(xiàn)用。

            自備儀器和用品:

            研缽、冰、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

            粗酶液提取

            1、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml) 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1ml 試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心 20min,取上清置冰上待測。

            2、細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104 個):試劑一體積(ml) 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加 1ml 試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);16000g, 4℃離心 20min,取上清液置冰上待測。

            3、血清等液體:直接測定。

            ADH 測定操作

            1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長到 340 nm,蒸餾水調(diào)零。

            2. 試劑三在 25℃水浴中保溫 30 min。

            3. 在微量石英比色皿/96 孔板中依次加入 20μl 樣本上清液、160μl 試劑三和 20μl 試劑四,迅速混勻后于340nm 測定吸光值變化,分別記錄 15s 75s 時吸光值,分別記為 A1 A2?!鰽 測定管=A1-A2

            計算公式

            a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

            (1) 按照蛋白濃度計算

            活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol NADH  1 個酶活單位。

            ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反總×109)÷(Cpr×V )÷T

            =1608×△A ÷Cpr

            (2) 按照樣本質(zhì)量計算

            活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化 1nmol NADH  1 個酶活單位。

            ADH (nmol/min/g 鮮重) =(△A÷ε÷d×V 反總×109)÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

            =1608×△A ÷W

            (3) 按細胞數(shù)量計算

            活性單位定義:25℃中每 104 個細胞每分鐘氧化 1nmol NADH  1 個酶活單位。

            ADH (nmol/min/104cell) = (△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷(細胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T

            =1608×△A ÷細胞數(shù)量

            (4) 按液體體積計算

            活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化 1nmol NADH  1 個酶活單位。

            ADH (nmol/min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷V ÷T

            =1608×△A

            ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V 反總:反應(yīng)體系總體積,200μl=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W :樣品質(zhì)量;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μl=0.02 ml; V 樣總:提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時間,1min。

            b. 使用 96 孔板測定的計算公式如下

            (1) 按照蛋白濃度計算

            活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1nmol NADH  1 個酶活單位。

            ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷(Cpr×V )÷T

            =3215×△A÷Cpr

            (2) 按照樣本質(zhì)量計算

            活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化 1nmol NADH  1 個酶活單位。

            ADH (nmol/min/g 鮮重) =(△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

            =3215×△A÷W

            (3) 按細胞數(shù)量計算

            活性單位定義:25℃中每 104 個細胞每分鐘氧化 1nmol NADH  1 個酶活單位。

            ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷(細胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T

            =3215×△A÷細胞數(shù)量

            (4) 按液體體積計算

            活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化 1nmol NADH  1 個酶活單位。

            ADH (nmol/min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反總×109) ÷V ÷T

            =3215×△A

            ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:96 孔板光徑,0.5 cm;V 反總:反應(yīng)體系總體積,200μl=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W :樣品質(zhì)量;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μl=0.02 ml; V 樣總:提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時間,1min。


            乙醇脫氫酶活性測定試劑盒 輔酶Ⅰ系列




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