BI6054 濾紙酶試劑盒 糖代謝系列-常備現(xiàn)貨
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 BI6054
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/4/11 15:36:13
- 訪問次數(shù) 45
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/24S |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BI6054 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 研究濾紙酶活力對纖維素酶的研究具有非常重要的意義。 |
濾紙酶（Filter paper Activity，FPA）試劑盒說明書
分光光度法 50 管/24 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
纖維素酶是由微生物產(chǎn)生的多組分的酶系，能水解纖維素β-1,4 葡萄糖苷鍵生成葡萄糖，研究濾紙酶活力對纖維素酶的研究具有非常重要的意義。
測定原理：
濾紙酶水解濾紙產(chǎn)生的還原糖能與 3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色氨基化合物，在 540nm 處有最大光吸收，在一定范圍內(nèi)反應(yīng)液顏色深淺與還原糖的量成正比，可測定計(jì)算得濾紙酶的活力。
濾紙酶試劑盒 糖代謝系列-常備現(xiàn)貨
組成：
產(chǎn)品名稱 | BI6054-50T/24S | Storage |
試劑一：液體 | 15ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 40ml | 4℃ |
濾紙條 | 50mg×50 條 | -- |
說明書 | 一份 | |
自備儀器和用品：
天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 ml 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
酶液提取：
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1ml 蒸餾水）加入蒸餾水，冰浴勻漿后于 4℃，12000rpm 離心 10min，取上清置于冰上待測。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：蒸餾水體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 4℃，12000rpm離心 10min，取上清置于冰上待測。
3. 培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測。
測定操作：
1. 根據(jù)樣本數(shù)量取兩倍數(shù)量的濾紙條和 Ep 管，每支Ep 管中放入一個(gè)卷狀濾紙條（注意要放入底部），作為底物。
2. 對照管：取 200μl 滅活的酶液，加入 500μl 試劑一，充分混勻，再加入放有濾紙條的 Ep 管中，標(biāo)注為對照管。
3. 測定管：取 200μl 酶液，加入 500μl 試劑一，充分混勻，再加入放有濾紙條的 Ep 管中，標(biāo)注為測定管。
4. 對照管和測定管同時(shí)置于 50℃水浴鍋中反應(yīng) 30min。
5. 加入 800μl 試劑二，沸水浴 5min，自來水冷卻后取 1ml 于 1ml 玻璃比色皿中測定 540nm 處吸光值，分別記為A 對照管和A 測定管。
酶活性計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.2805x - 0.0255，R2 = 0.9991
（1） 按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在 50℃，pH4.6 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解濾紙產(chǎn)生 1mg 葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
FPA（U/mg prot）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T
= 0.891×（△A+0.0255）÷ Cpr
（2） 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在 50℃，pH4.6 條件下，每克組織每分鐘分解濾紙產(chǎn)生 1mg 葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
FPA（U/g 鮮重）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T
= 0.891×（△A+0.0255）÷ W
（3） 按液體體積計(jì)算
酶活性定義：在 50℃，pH4.6 條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解濾紙產(chǎn)生 1mg 葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
FPA（U/ml）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V 反總÷V 樣÷T
= 0.891×（△A+0.0255）
（4） 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：在 50℃，pH4.6 條件下，每 104 個(gè)細(xì)胞每分鐘分解濾紙產(chǎn)生 1mg 葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
FPA（U/104cell）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）÷V 樣總）÷T
= 0.891×（△A+0.0255）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）
V 反總：反應(yīng)總體積，1.5ml，V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.2ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；
Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min
注意事項(xiàng)：
1. 用干凈的鑷子取出濾紙條，帶手套卷成卷放入Ep 管底部。
2. 樣本滅活時(shí)保證同一批樣本處理時(shí)間一致，建議沸水浴十分鐘。
3. 批量樣本測定之前先做 1-2 個(gè)樣本的預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值超過 1.2，建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測定，計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
4. 顯色后取檢測液時(shí)注意槍頭不要碰到濾紙條，以免帶入毛狀物，影響測定結(jié)果。
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