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硒（Se）是人體必須的微量元素之一，它具有抗癌、抗氧化、提高機體免疫力等功能。硒主要通過食物攝入人體，硒各種形態(tài)決定其不同的功能，其中無機硒主要為硒酸根Se(Ⅵ)和Se(Ⅳ)，無機硒攝入過量會引起中毒，有機硒主要有硒代胱氨酸（SeCys2）、甲基硒代半胱氨酸（MeSeCys）和硒代蛋氨酸（SeMet），是容易被人體吸收的。

近年來，隨著人們健康意識的增強，富硒農(nóng)產(chǎn)品越來越受歡迎。但是，由于富硒農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)方式各異，農(nóng)產(chǎn)品中硒的賦存形態(tài)有很大的不同。而水稻作為人們?nèi)粘z入的主食，是人們攝入硒形態(tài)的來源之一，因此，對水稻中硒的形態(tài)分析具有重要的意義。

本實驗采用電感耦合等離子體質(zhì)譜與液相色譜聯(lián)用對水稻中SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)進行分析，采用水浴恒溫振蕩的方法提取水稻中硒形態(tài)，得到方法檢出限、精密度以及實際樣品的加標回收率。

關鍵詞：LC-ICP-MS；農(nóng)作物；水稻；液相聯(lián)用；五種硒形態(tài) 

實驗部分

儀器

表1 液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜儀

表2 LC-ICP-MS儀器工作參數(shù)

化學品與試劑

      一水合檸檬酸（色譜級）購于阿拉丁，氨水（分析純）購于國藥，Se(Ⅳ)（濃度為1003±5μg/mL，以硒計）購于Inorganic Ventures，SeCys2（濃度為44.2±1.0μg/g，以硒計）、MeSeCys（濃度為34.8±1.0μg/g，以硒計）、SeMet（濃度為39.4±1.0μg/g，以硒計）、Se(Ⅵ)（濃度為41.4±1.3μg/g，以硒計）均購于中國計量科學研究院。

實驗原理

      水稻樣品經(jīng)過蛋白酶XIV提取后，用高效液相色譜分離不同的硒形態(tài)，電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測，外標法定量。本次實驗主要對水稻樣品中SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)的含量進行分析。

樣品處理

      稱量0.2g樣品于離心管中，加入10mL 30mmol/L Tris-Hcl（pH=7.5）溶液，加入3mg蛋白酶XIV，超聲10min，在37℃下恒溫水浴搖床上振蕩2h。10000r/min離心5分鐘，0.45μm濾膜過濾。上機測試，在上述相同情況下制備樣品空白。

測試結果

      硒形態(tài)標準曲線如圖3所示，硒形態(tài)標準樣品色譜圖如圖4所示，水稻樣品色譜圖如圖5所示。SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)的標準曲線的線性均達到0.999以上。

圖4 硒形態(tài)標準樣品色譜圖

圖5 水稻樣品中硒形態(tài)色譜圖

樣品含量

      對三個平行水稻樣品提取液進樣測試，其實際水稻樣品中SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)含量結果如表4所示。

表4 水稻中五種硒形態(tài)含量（μg/kg）

精密度測試

      水稻樣品提取液連續(xù)3次重復進樣，其精密度上機測定結果如表5所示。

表5 水稻樣品提取液精密度測試結果（μg/L）

加標回收率測試

      為考察該方法的可靠性，向水稻樣中加入一定量的硒形態(tài)標準溶液，混合均勻后，通過蛋白酶XIV水浴恒溫振蕩提取。從表中可以看出，對水稻樣品進行前加標，加標回收率在66.8%-109%之間。

檢出限測試

      選取水稻空白樣品提取溶液，連續(xù)7次平行測定，計算樣品測定的標準偏差SD，檢出限為3*SD。水稻樣品中兩種汞形態(tài)的方法檢出限在0.0044mg/kg -0.0153mg/kg之間。

結論

      本文采用LC-ICP-MS測定水稻樣品中硒形態(tài)的含量。本方法以20mM檸檬酸為流動相，使用陰離子色譜柱，在12min內(nèi)將SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)分離，在常規(guī)模式下用電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測。結果表明， SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)的方法檢出限在0.0044mg/kg -0.0153mg/kg。樣品的前加標回收率在66.8%-109%之間，標準曲線線性系數(shù)R2均大于0.999，表明該前處理方法可靠，能滿足水稻中SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)的快速測定。

設備與耗材方案

一、液相聯(lián)用系統(tǒng)配置詳情

• ICP-MS

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