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北京西美杰科技有限公司
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- 型號 Cell Biolabs
- 品牌 Cell Biolabs
- 廠商性質 代理商
- 所在地 北京市
更新時間：2020-08-18 17:03:03瀏覽次數：1777
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Cell Biolabs病毒載體丨腺相關病毒（AAV）載體
腺相關病毒AAV具有表達滴度高、宿主免疫反應輕微、感染譜廣、安全性高等優(yōu)勢，成為近年來在基因治療領域應用廣泛的病毒載體之一。西美杰代理的Cell Biolabs （AAV Helper Free Expression System）的AAV三質粒表達系統也是目前常用的一類AAV載體系統。
該套AAV系統包含表達載體（Expression vector）、包裝質粒（Rep-Cap plasmid）和輔助質粒（pHelper plasmid）。其中表達載體是AAV病毒的核心，包含了ITR序列、CMV啟動子、多克隆位點等，用于攜帶外源基因；包裝質粒負責表達AAV病毒的結構蛋白，決定AAV的血清型和組織嗜性。由于野生型AAV是復制缺陷型的，必須依賴輔助病毒（如腺病毒）才可以感染靶細胞。AAV Helper Free Expression System利用在不同質粒上提供這些必要的輔助基因來確保重組AAV病毒具有感染性，消除AAV對輔助病毒的依賴，解決了AAV生產過程中要去除腺病毒污染的難題。
- Expression vector包含ITR序列，多克隆位點，攜帶目的基因；
- Rep-Cap plasmid包含Rep和Cap基因，決定了重組AAV的血清型和組織嗜性；
- pHelper plasmid 包含腺病毒的VA、E2A和E4基因，使重組AAV具有感染性。
- AAV表達載體
AAV基因組為4.7kb，能夠攜帶的外源基因上限在4kb左右。Cell Biolabs提供了8種AAV的表達載體，兼容常用的各種AAV包裝系統，表達載體都攜帶有2個ITR序列，使AAV基因組能正確形成T-形二級結構，進而保證了病毒的有效復制和包裝。載體上有氨芐抗性基因、多克隆位點，還可以根據實驗需要選擇帶標簽、無標簽、不含啟動子或自身互補型（self-complementary）AAV表達載體（產品詳情如下表）。
貨號 | 質粒名稱 | 載體容量（kb） | 特征 |
VPK-415 | pAAV-IRES-Puro | 1.8 | Puro標簽 |
VPK-416 | pAAV-IRES-Neo | 1.6 | Neo標簽 |
VPK-417 | pAAV-IRES-Hygro | 1.4 | Hygro標簽 |
VPK-418 | pAAV-IRES-GFP | 1.7 | GFP標簽 |
VPK-419 | pAAV-IRES-Bsd | 2 | BSD標簽 |
VPK-410 | pAAV-MCS | 3 | 無標簽 |
VPK-411 | pAAV-MCS Promoterless | 4 | 無啟動子 |
VPK-430 | pscAAV-MCS | 1.5 | self-complementary |
- AAV包裝質粒
AAV共有12個血清型，其中AAV1-6是從人類組織中分離獲得，并且具有明確的的抗體反應性，是目前常用的經典AAV載體。盡管不同血清型AAV都具有正二十面體結構，但其衣殼蛋白在序列與空間構象上的多樣性，使得AAV與不同細胞表面受體親和力及組織嗜性存在顯著差異。在感染嗜性方面，AAV-2的感染譜較廣應用較多，AAV-1在骨骼肌中的轉導效率較高，AAV-3易于轉導巨核細胞，AAV-5和AAV-6感染呼吸道上皮細胞的優(yōu)勢較為顯著。因此，根據AAV不同血清型在組織感染性的相對特異性，可以用于在針對不同靶向組織的基因治療中尋求合適的AAV載體類型與組合。除了常見的六個血清型AAV之外，Cell Biolabs還提供兩種重組型AAV包裝質粒即AAV-DJ與AAV-DJ-8，如下圖所示，這兩種AAV的Rep-Cap基因是由多個野生型AAV的結構基因重組而來，與其他野生型相比，AAV-DJ在體外細胞轉導效率更高，AAV-DJ-8則更適用于體內感染實驗。
以常用的AAV-2為參照，下表比較不同血清型AAV對種屬、組織細胞的感染率。值得一提的是，AAV-DJ對不同物種的肝細胞、黑色素瘤細胞以及胚胎干細胞的感染能力都有優(yōu)勢，甚至高于常用的AAV-2。
輔助質粒pHelper plasmid是確保重組AAV具有感染性的重要質粒，pHelper載體中包含了腺病毒的E2A、E4基因和VA RNA，由于我們常用的AAV包裝細胞系293和293T都含有E1基因，因此該系統中的pHelper質粒上沒有再提供E1基因。
AAV包裝質粒貨號（Rep-Cap&pHelper plasmids） | VPK-401 | VPK-402 | VPK-403 | VPK-404 | VPK-405 | VPK-406 | VPK-400-DJ | VPK-400-DJ-8 | |
細胞系 | 組織類型 | AAV-1 | AAV-2 | AAV-3 | AAV-4 | AAV-5 | AAV-6 | AAV-DJ | AAV-DJ/8 |
Huh-7 | 人肝臟 | 13 | 100 | 2.5 | 0.0 | 0.1 | 10 | 500 | 0.2 |
HEK293 | 人腎臟 | 25 | 100 | 2.5 | 0.1 | 0.1 | 5 | 500 | 0.3 |
HeLa | 人子宮 | 3 | 100 | 2.0 | 0.1 | 6.7 | 1 | 667 | 0.2 |
HepG2 | 人肝臟 | 3 | 100 | 16.7 | 0.3 | 1.7 | 5 | 1250 | 0.5 |
Hep1A | 小鼠肝臟 | 20 | 100 | 0.2 | 1.0 | 0.1 | 1 | 400 | 0.1 |
911 | 人視網膜 | 17 | 100 | 11 | 0.2 | 0.1 | 17 | 500 | 0.0 |
CHO | 倉鼠卵巢 | 100 | 100 | 14 | 1.4 | 333 | 50 | 25000 | 5.0 |
COS | 非洲綠猴腎臟 | 33 | 100 | 33 | 3.3 | 5.0 | 14 | 500 | 0.3 |
MeWo | 人皮膚 | 10 | 100 | 20 | 0.3 | 6.7 | 10 | 2857 | 1.0 |
NIH3T3 | 小鼠成纖維 | 10 | 100 | 2.9 | 2.9 | 0.3 | 10 | 500 | 0.1 |
A549 | 人肺臟 | 14 | 100 | 20 | ND | 0.5 | 10 | 1000 | 0.1 |
HT1180 | 人成纖維 | 20 | 100 | 10 | 0.1 | 0.3 | 33 | 333 | 0.2 |
Monocytes | 人原代單核細胞 | 1111 | 100 | ND | ND | 125 | 1429 | 100 | ND |
Immature DC | 人樹突細胞 | 2500 | 100 | ND | ND | 222 | 2857 | 200 | ND |
Mature DC | 人樹突細胞 | 2222 | 100 | ND | ND | 333 | 3333 | 100 | ND |
ND = Not Determined
Cell Biolabs病毒載體丨腺相關病毒（AAV）載體
西美杰代理的Cell Biolabs品牌除了提供AAV病毒的全套載體系統外，還有腺病毒（Adenovirus），慢病毒（Lentivirus）和逆轉錄病毒（Retrovirus）載體系統，為廣大科研用戶提供了高效、便捷的病毒載體產品庫，小編之后還會一一為大家介紹這些病毒載體，敬請期待！
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