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            超濾離心管常見問題

            時間:2017/7/14閱讀:6309
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            離心管是一個簡單的可以承受高轉(zhuǎn)速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉淀。超濾離心管會有一個類似于內(nèi)管和外管的兩個部分,內(nèi)管中是帶有一定分子量的膜,當高速離心時,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內(nèi)管中),就是超濾的原理.常用于濃縮樣品。

            超濾離心管的分子量選擇:
                 按照樣品量和目標分子量選擇適當?shù)某瑸V離心管,為了得到zui高的收率,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,不超過目標分子量的一半。因為超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜上的孔并非均勻,離心高壓下也可能滲漏,因此截留孔徑越小,流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大,可選擇較小容積的超濾管多次重復加樣離心。如果同時需要脫鹽和去除可溶小分子雜質(zhì),可將待濃縮樣品稀釋到超濾管zui大容積再離心,重復2次可除去99%鹽。避免過長時間或者過速離心,雖然高品質(zhì)的產(chǎn)品都有防死端設計,可避免過度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免過度濃縮,zui終體積越小,越容易因表面吸附而損失得率。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,必要時補加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,能提高回收率。盡量避免Tips接觸膜表面。

            超濾離心管是否要預處理:
                 超濾離心管通常不需要預處理即可使用,不過對于蛋白質(zhì)樣本處理,特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附zui小化,但是,某些蛋白,特別是稀的時候,會有問題。非特異結合的程度隨著個別蛋白結構的不同而不同。含有帶電的或者疏水結構域的蛋白質(zhì)更易于不可逆結合到不同表面。對超濾離心管表面做鈍化預處理可降低蛋白質(zhì)在膜表面的吸附性損失,大多數(shù)情況下,在濃縮稀蛋白溶液之前預處理柱子可以提高回收率,因為溶液可填滿膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點。鈍化的方法是預先用zui高容積的鈍化溶液預浸泡柱子1小時以上,蒸餾水*沖洗柱子,再用蒸餾水離心一次以*除去可能殘留在膜上的鈍化溶液。注意鈍化處理后別讓膜干了。如果要留待以后使用,需要加無菌蒸餾水保持膜濕潤。

            常用的鈍化溶液可選擇:
            1、1%牛血清白蛋白磷酸緩沖液溶液
            2、5%十二烷基磺酸鈉蒸餾水水溶液
            3、5%Tween-20非離子活性劑蒸餾水溶液
            4、5%Triton-X 蒸餾水溶液
            5、5%聚乙二醇化合物蒸餾水溶液
            6、1%免疫球蛋白IgG磷酸緩沖液溶液
            超濾離心管因為需要高速離心,某些對剪切力或壓力誘導下易變性的不穩(wěn)定樣品可能不太適合。另外超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜容易堵,對于有微小顆?;蛘咚槠臉悠罚芟扔幂^大孔徑的超濾管過濾一次,再進行下一步濃縮。

            超濾離心管是否可以重復使用:
                 離心超濾管通常不能消毒再次性使用。由于單管價格并不便宜,不少人嘗試重復使用----經(jīng)驗是用蒸餾水清洗膜表面多次,離心一次到兩次,那種可以反向離心的小管子可以加蒸餾水浸泡后反向多離心一次,會好些。可重復用于同一樣品,不用時可用蒸餾水浸泡,但是要防止細菌污染。不同樣品就不要混用了。有人說泡在20%酒精、1N的NaOH(氫氧化鈉)中,防止長菌,而且防干,只要超濾膜侵了水,就不可以再讓它干,但也有人說會破壞膜結構。反正廠家一般不支持重復用。多次重復使用會堵塞濾膜上的孔徑,甚至出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,影響實驗結果。

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