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elisa實驗過程中可能出現(xiàn)的問題及處理!
一般來講，實驗失敗應當是技術(shù)錯誤，設備損壞或反應物失效。當一個實驗失敗，檢查每個反應物的有效期并且確定所有的反應物均是按產(chǎn)品標示的說明來存放的。另外，查看注意事項部分內(nèi)容。當進行試驗時如果出現(xiàn)可疑的現(xiàn)象或發(fā)生問題，可以參照下表來分析問題。
| 可能問題 | 可能原因 | 采用措施 |
| 無顏色 | 漏加酶標抗體 | 檢查操作流程，注意不要漏加 |
| 酶標抗體污染了疊氮鈉 | 應嚴格避免疊氮鈉的污染 | |
| 不同試劑盒組份混用 | 檢查試劑標簽，確認所有組份屬于試劑盒中 | |
| 顯色弱 | 產(chǎn)品已經(jīng)超過有效期 | 檢查產(chǎn)品有效期 |
| 加入的試劑的體積和時間有誤 | 確認所使用的每一個試劑的體積正確和加入的時間是符合說明書要求的 | |
| 試劑、樣品用前未能平衡 | 試劑、樣品用前置室溫平衡30分鐘 | |
| 孵育時間不足 | 檢查孵育時間 | |
| 在溫度變化的環(huán)境內(nèi)孵育酶標板 | 確定孵育的溫度，避免溫度變化 | |
| 儀器設定不正確，濾光片不匹配 | 儀器是否設定正確，濾光片的使用是否正確 | |
| 使用了被污染的試劑 | 檢查試劑是否被污染 | |
| 拍板不* | 經(jīng)拍板后板子要干 | |
| 整板黃 | 緩沖液污染 | 制備新鮮的緩沖液 |
| 吸頭重復使用 | 吸頭應一次性使用 | |
| 器材被污染 | 應使用無污染的器材 | |
| 底物液被污染 | 更換底物液 | |
| 高復孔比 | 洗板不* | 洗板部分一定要做得* |
| 出現(xiàn)干板，沒有使用密封袋，密封袋重復使用 | 酶標板應保持濕潤，使用密封袋孵育，注意每步更換新的密封袋 | |
| 拍干不充分 | 經(jīng)拍板后板子要干 | |
| 孔內(nèi)加液體積不均等 | 確定移液器已校正并且工作正常，吸頭不得重復使用 | |
| 緩沖液污染 | 制備新鮮的緩沖液 | |
| 高本底 | 緩沖液污染 | 制備新鮮的緩沖液 |
| 每孔加液體積不均等 | 確定移液器已校正并且工作正常 | |
| 洗板不* | 洗板部分一定要做得* | |
| 拍干不充分 | 經(jīng)拍板后板子要干 | |
| 試驗中孵育時間溫度和時間不適當 | 確認每一實驗步驟的孵育溫度和時間是否適當 | |
| 酶標抗體稀釋錯誤 | 確認工作濃度酶標抗體配置正確 | |
| 底物液受光照時間較長或污染 | 底物液應在使用前打開，并避免強光照射 | |
| 吸頭重復使用 | 吸頭應一次性使用 | |
| 標準曲線線性差 | 標準加樣錯誤 | 確定移液器已校正并且工作正常 |
| 酶標抗體濃度過低 | 確認工作濃度酶標抗體配置正確 | |
| 酶標板顯色孵育時間、溫度不足 | 按說明書要求操作 | |
| 操作不慎 | 回顧操作流程，嚴格按說明書要求操作 |
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