已停產(chǎn)?。?！

英文說(shuō)明書(shū)：

Nylon Fiber Column T （L-Type）

Grade: for T-cell Separation  
Storage condition: Keep at RT.
Manufacturer: Wako

Summary
 
This product is for research use only.  Do not administer it to human.
We offer two sizes of Nylon Fiber Column T; Nylon Fiber Column T is for separation of T-cells of mouse lymphocytes and the L-type is for that of a large amount of suspended solution, especially rat splenic lymphocytes and the L-Type is for that of a large amount of suspended solution, especially rat splenic lymphocytes, and peripheral blood lymphocytes of rabbit and human.

Features:
1. Simple procedure.
2. High reproducibility.
3. Sterilized.
4. Using a high quality nylon fiber.

Cell Recovery:
13 - 25% （mouse） when Nylon Fiber Column T was used.
25 - 35% （rat）, 20 - 30% （human） and 25 - 30% （rabbit） when Nylon Fiber Column T （L-Type） was used.

B-cell contamination:
Less than 15%
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Nylon Fiber Column T

Grade: for T-cell Separation   
Storage condition: Keep at RT.
Manufacturer: Wako 

Summary
This product is for research use only. Do not administer it to human.
We offer two sizes of Nylon Fiber Column T; Nylon Fiber Column T is for separation of T-cells of mouse lymphocytes and the L-type is for that of a large amount of suspended solution, especially rat splenic lymphocytes and the L-Type is for that of a large amount of suspended solution, especially rat splenic lymphocytes, and peripheral blood lymphocytes of rabbit and human.
Features:
1. Simple procedure.
2. High reproducibility.
3. Sterilized.
4. Using a high quality nylon fiber.
Cell Recovery:
13 - 25% （mouse） when Nylon Fiber Column T was used.
25 - 35% （rat）, 20 - 30% （human） and 25 - 30% （rabbit） when Nylon Fiber Column T （L-Type） was used.
B-cell contamination:
Less than 15% 
 

中文說(shuō)明書(shū)：

在研究體內(nèi)及體外的免疫系統(tǒng)時(shí)，分離淋巴細(xì)胞群是一個(gè)關(guān)鍵步驟。因?yàn)楝F(xiàn)在市場(chǎng)上并沒(méi)有針對(duì)B細(xì)胞的特異性抗血清，所以分離淋巴細(xì)胞中的T細(xì)胞并不是十分方便。T細(xì)胞尼龍毛分離法利用了尼龍毛對(duì)B細(xì)胞的親和力，從而使T細(xì)胞在沒(méi)有嚴(yán)重?fù)p傷的情況下達(dá)到的足夠的純度。因?yàn)檫@個(gè)方法不像流式和磁珠費(fèi)用昂貴，而且操作簡(jiǎn)便，所需要的條件也不高，是一種非常實(shí)用的方法。
（在此我向各位解釋一下，現(xiàn)在分離T細(xì)胞的方法主要是三種，流式，磁珠法，尼龍毛法。與前兩種方法相比，尼龍毛法的優(yōu)勢(shì)在于無(wú)需特定的設(shè)備儀器，一般的實(shí)驗(yàn)室均有條件操作；價(jià)格相對(duì)低廉；可以進(jìn)行大量樣本操作。）
首先要指出的是實(shí)驗(yàn)中所使用的是分離T細(xì)胞的尼龍毛（Nylon Fiber），不是化工上的尼龍纖維，曾經(jīng)有人問(wèn)過(guò)我這種問(wèn)題，如果你買(mǎi)錯(cuò)了，可是做不出來(lái)的！其次，現(xiàn)在市面上的尼龍毛也是良雋不齊，也有同仁反應(yīng)買(mǎi)到的尼龍毛加入緩沖液以后成了一團(tuán)糨糊，根本沒(méi)法使用，這個(gè)問(wèn)題就要靠各位的慧眼了。
現(xiàn)在市面上有尼龍毛填料，也已經(jīng)有了商品化的尼龍毛柱子，這兩者的區(qū)別主要是以下兩點(diǎn)：
1.商品化的柱子的填料量是已經(jīng)定好的，有一個(gè)確定的上樣量范圍。而自己買(mǎi)填料裝柱可以控制填料量，也就是可以控制上樣量，這對(duì)于樣本量非常少，或是樣本量非常大的實(shí)驗(yàn)需求非常合適。
2.商品化的柱子已經(jīng)經(jīng)過(guò)了無(wú)菌處理（一般是輻射滅菌），而自己裝柱當(dāng)然就要自己滅菌了。
3.商品化的柱子在實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性上有著的優(yōu)勢(shì)。自己裝的柱子在填料的處理和裝柱的松緊等方面不容易控制，差異性的控制就看你的實(shí)驗(yàn)技巧了。
操作方法：
1.秤取1.5g尼龍毛裝入20-30ml玻璃或一次性注射器內(nèi)（要可以滅菌的），填料的體積控制在15毫升左右（注射器上有標(biāo)記，所以還是比較好控制的），因?yàn)槟猃埫乃删o關(guān)系到T細(xì)胞的回收率，所以要特別注意。注射器下端配接5厘米左右長(zhǎng)的帶有彈簧夾的橡皮管。
2. 加入大量的PBS平衡柱子后，用鋁箔包裹，并置于適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)，高壓滅菌15分鐘。
（商品化尼龍毛柱以上步驟可以省略，經(jīng)過(guò)無(wú)菌PBS平衡后直接進(jìn)行下列步驟。）
3. 滅菌的尼龍毛柱垂直固定后放于超凈臺(tái)內(nèi)，頂部以鋁箔覆蓋，避免污染。
4. 橡皮管，彈簧夾用*消毒后接注射器下端，打開(kāi)彈簧夾調(diào)節(jié)流速在大約3-4ml/min。
5.首先，加入3-4倍柱體的無(wú)血培養(yǎng)基平衡；隨后，之后加入相同體積的含有血清的培養(yǎng)基平衡（上述培養(yǎng)基都要預(yù)熱），zui后等培養(yǎng)基頁(yè)面接近柱填料頁(yè)面時(shí)，關(guān)閉彈簧夾。
6. 樣本細(xì)胞懸浮液濃度控制在5×108cells/ml的，上樣量一般是1/3-1/5柱體積（商品化的柱子一般都有推薦上樣量）。樣品加入之后，再加入少量培養(yǎng)液，然后關(guān)閉彈簧夾。
7. 柱上覆蓋鋁箔，移置于消毒過(guò)的容器中，37℃孵育1小時(shí)。此過(guò)程中柱子必須要保持垂直狀態(tài)。
8. 從培養(yǎng)箱中拿出柱子，置于超凈臺(tái)內(nèi)，除去鋁箔。接上按照4.中的方法消毒的彈簧夾和橡皮管，加入適當(dāng)體積經(jīng)37℃預(yù)熱的培養(yǎng)基，打開(kāi)彈簧夾控制流速在3-4 mL/min，流出約5ml之后，流出的培養(yǎng)液基變得不透明，此時(shí)其中含有T細(xì)胞，收集這一部分培養(yǎng)基。
9. 基本上何時(shí)結(jié)束收集取決于流出液體中細(xì)胞的濃度，實(shí)際上，收集的量達(dá)到一個(gè)柱體積時(shí)就可以停止收集，因?yàn)榧词故占嗟牧?，回收率幾乎不?huì)增加。
10 。參考數(shù)據(jù)：

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