5~10 mL 細(xì)菌培養(yǎng)液中純化提取30~70ug高純度質(zhì)粒DNA。

試劑盒組分

1. 使用前請(qǐng)將適量乙醇加入DNA Wash Buffer，令乙醇終濃度為80%
2. 純化中低拷貝的質(zhì)粒時(shí)，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同體積的Wash Buffer和Elution Buffer
3. 若為-70^oC甘油凍存的菌，請(qǐng)先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng)。
4. 若用于提取1-4 mL的菌落，請(qǐng)將Buffer A1, B1, N1的量降低至250 µL, 250 µL 及 350 µL，DNA wash Buffer及Elution Buffer的量不變。

1. 接種新鮮的單個(gè)菌落到5-12 mL的LB培養(yǎng)基（含適量抗生素），37^oC震蕩培養(yǎng)14-16小時(shí)（勿超過(guò)16小時(shí)）。室溫下10,000 rpm離心1分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
2. 加入450 µL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩充分懸浮細(xì)菌細(xì)胞。
3. 加入 450 µL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)多次至溶液充分混勻，室溫靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。 
4. 加入550 µL Buffer N1, 立即反轉(zhuǎn)多次，至溶液充分混勻，此時(shí)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
5. 將離心管轉(zhuǎn)至高速離心機(jī)，在室溫下13,000 rpm離心10分鐘（若上清中有白色沉淀，可再次離心）。
6. 小心吸取700 µL離心后的上清液至帶有收集管的DNA柱中（避免吸起沉淀），室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“7”至全部上清離心過(guò)DNA柱。
7. 可選: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
8. 向離心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer（確保已加入無(wú)水乙醇），室溫下，13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“8”。
9. 將離心柱放回高速離心機(jī)中，13,000 rpm室溫下開(kāi)蓋離心2分鐘，以*去除殘留的乙醇。
10. 將離心柱轉(zhuǎn)至一個(gè)新的1.5 mL離心管中，向DNA柱的正中間加入100~150 µL（體積>100 µL）的ddH₂O（pH在7.0-8.5之間）或Elution Buffer，室溫放置2分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，洗脫質(zhì)粒DNA。將洗脫液再加到柱的中間，13,000 rpm 離心1分鐘，洗脫質(zhì)粒DNA。

操作流程：