實驗室透析常見問題解答（三）

Q1：關于膜表面積和樣品量之間的關系有沒有經(jīng)驗法則？

表面積與體積的比值取決于膜管扁平寬度。如果有兩段相同長度的膜管，扁平寬度較小的膜管具有較高的比表面積，而扁平寬度較大的膜管比表面積相對較小，也就是說，前者的透析速率更快。原因是扁平寬度較小的膜管，溶質的擴散距離較短，溶質之間通過膜孔的競爭也較小。而扁平寬度大，亦即溶質到達膜表面的距離也較長，溶質之間對膜孔的競爭也較大。一般而言，比表面積越大，透析越快。

Q2：如果膜兩側的摩爾滲透壓濃度相等，但濃度梯度仍然存在，物質的通過效率如何？

大多數(shù)透析結束時膜兩側滲透壓相同。透析過程是由膜管內(nèi)外兩側的濃度梯度驅動的。如果滲透壓力有很大的差別，水會通過膜以平衡膜兩側的滲透壓。如果過多的水通過膜，透析膜管可能會隨水運動的方向增大或縮小，在體積增加到一定程度時，有可能導致膜夾松動或膜管破裂。

Q3：進行超濾時，透析膜能承受多大的壓力？

透析膜設計不適合用于壓力過濾。在不影響截留分子量的前提下，zui大推薦壓力為1.5 psi。

Q4：一般推薦使用哪種透析液（緩沖液）？

生物分子必須保存在嚴格的pH值控制條件下，以穩(wěn)定其分子極性。典型的透析緩沖液pH范圍為6-8。以下為常用的幾種可以作為緩沖液的生化溶液：

• 水
• PBS
• TBS
• HEPES
• 氨基酸緩沖液

Q5：為什么使用微米vs道爾頓（MW）單位，怎么轉換？

溶解的分子大小以分子量來定義，單位為道爾頓，而顆粒和細胞大小常以直徑來定義，由于分子的結構和形態(tài)不同，相同分子量的物質，分子大小和形態(tài)可能相差較大，兩者之間沒有的對應關系。出于這個原因，許多常見的生物材料都已特別定性，并將大約的尺寸標注在轉換表上作為估算的參考，以用于透析、超濾和微濾應用。道爾頓與微米單位之間的轉化見圖。

Q6：對于鹽濃度較高的樣品，*的透析方法是什么？

如果可能，我們推薦使用低鹽濃度的緩沖液。不推薦直接使用純DI水作為緩沖液，因為滲透壓力可能將水引入膜管，使樣品體積膨脹并可能導致膜管破裂。使用一系列濃度逐漸降低的溶液作為緩沖液可防止?jié)B透壓力導致的膜管膨脹。每次緩沖液置換，可將溶質濃度降低十分之一，也就是說，透析一個5M NaCl的樣品，可使用500 mM NaCl的緩沖液。

Q7：可以使用繩子結扎膜管，而不使用膜夾嗎？

我們不推薦使用繩子結扎膜管。因為繩結對膜管的損害具有很大的不確定性，并且可能不能提供有效的密封，而導致泄露。只有膜夾才能提供足夠的密封性，從而保護樣品。

Q8：透析膜管應該剪多長？

對于每種膜管扁平寬度，spectrumlabs提供相關的容積/長度比，可方便計算透析樣品所需的膜管長度。如果扁平寬度為16 mm，容積/長度比為0.79 ml/cm，要容納5 ml的樣品，則需要大約6.5 cm長的膜管。但是，為保持樣品漂浮，一般需要在頂部空間預留10-20%膜長（約為1 cm）。此外，也需在兩端為膜夾各預留2 cm。所以總的膜管長度應至少為11.5 cm。

可根據(jù)以下公式計算膜管長度：

總長度=（樣品體積）/（容積/長度）+（額外的10-20%）+4 cm

根據(jù)樣品體積和扁平寬度，計算所需的膜管長度。