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魚肉中妥布霉素的測定——SPE-UPLC-MS/MS法解決方案
魚肉中妥布霉素的測定——SPE-UPLC-MS/MS法解決方案
參考標(biāo)準(zhǔn)《GB/T 21323-2007 動物組織中氨基糖苷類藥物殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法》
目前有關(guān)妥布霉素檢測的文獻(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)較少，主要參考標(biāo)準(zhǔn)《GB/T 21323-2007 動物組織中氨基糖苷類藥物殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜法》；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)具有高靈敏度和高特異性，適用于基質(zhì)復(fù)雜、樣品組分含量很低的獸藥殘留的確證分析。
方法優(yōu)勢
迪馬科技開發(fā)的《魚肉中妥布霉素的檢測》：
- 采用三氯乙酸水提取、ProElut PXC固相萃取柱凈化和超液相色譜-質(zhì)譜法檢測；
- 具有前處理步驟簡單、回收率高、方法穩(wěn)定性好、凈化效果優(yōu)異等特點(diǎn)；
- 使用氰基液相色譜柱進(jìn)行分析，峰形和保留時間均符合要求；
- 過柱方法簡單易操作，對操作人員要求不高，檢測成本相對較低；
- 定量限是20 μg/kg，與國標(biāo)方法一致。
魚肉中妥布霉素的測定——SPE-UPLC-MS/MS法
1、適用范圍
本方案適用于魚肉中妥布霉素檢測。本方法定量限是20.0 μg/kg。
2、 標(biāo)準(zhǔn)品配制
(1) 單標(biāo)儲備液1000 μg/mL，準(zhǔn)確稱取妥布霉素，用水配制成1000 μg/mL的儲備液。
(2) 中間液10.0 μg/mL，吸取適量單標(biāo)儲備液1000 μg/mL，用水配制成10 μg/mL的中間液。
3、提取
(1) 稱取樣品（魚肉）5.0 g（至0.05 g），置于50mL離心管中。加入20 mL三氯乙酸水（25 g/L）和2 mL二氯甲烷，渦旋分散，振蕩5 min，8000 r/min離心2min，收集上清液；
(2) 在上清液中加入5 mL乙腈混勻，8000 r/min離心2 min，待凈化（離心為了去除乙腈水溶解時產(chǎn)生的氣泡）。
4、凈化—— ProElut PXC 60 mg/3 mL（Cat.# 68203）
(1)活化： | 依次加入3 mL甲醇，3 mL水，流出液棄去； |
(2)上樣： | 將上樣液加入柱中，流出液棄去； |
(3)淋洗： (4)洗脫： | 依次用5 mL水、3 mL甲醇淋洗，流出液棄去； 3 mL 20%氨水甲醇洗脫，收集洗脫液； |
(5)定容： | 將洗脫液在40 ℃水浴下通入氮?dú)獯抵?/span>0.2 mL，然后用流動相重新定容至0.5 mL，上機(jī)分析。 |
同方法制備基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。
5、色譜條件
UPLC 條件：
色譜柱：Platisil CN，150 x 4.6 mm，5 μm (Cat.# 99506)
流 速：0.5 mL/min
進(jìn)樣量：5 μL
柱 溫：35 ℃
流動相： A：3%甲酸水 B：3%甲酸乙腈 A：B=9:1
質(zhì)譜條件：
電離模式：ESI | 掃描方式：正離子掃描 |
檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測 | 電噴霧電壓：5500 V |
霧化氣壓力：60 psi | 輔助氣壓力：60 psi |
氣簾氣壓力：20 psi | 離子源溫度：550 ℃ |
定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表
藥物名稱 | 定性離子對 （m/z） (母離子/子離子) | 定量離子對 （m/z） (母離子/子離子) | 碰撞氣能量/eV | 去簇電壓/V |
妥布霉素 | 468.2/163.1 | 468.4/163.2 | 35 | 70 |
468.4/144.8 | 25 | |||
468.4/205.3 | 30 | |||
468.2/324.1 | 20 |
6、添加回收結(jié)果
魚肉中妥布霉素檢測的添加回收結(jié)果(%)
| 回收率（%） | ||
添加濃度為20 μg/kg，加標(biāo)量：10 μg/mL，加10 μL | |||
龍利魚 | 鯽魚 | 鰻魚 | |
妥布霉素 | 89.2 | 95.3 | 93.7 |
|
妥布霉素標(biāo)準(zhǔn)品0.2 μg/mL的MRM色譜圖
魚肉中妥布霉素的測定——SPE-UPLC-MS/MS法相關(guān)產(chǎn)品信息
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
樣品前處理 | ||
68203 | ProElut PXC | 60 mg/3 mL 50/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取裝置 | 12位 |
4803 | 1,3,6 mL柱管通用連接器 | 15/pk |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正壓兩用泵，無油 | 1/pk |
99013 | 抽濾瓶套裝 (包括硅橡膠管2米, 2 L抽濾瓶及橡膠塞) | 1/pk |
30039 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm, 0.22 μm 100/pk |
30040 | FitMax針頭式過濾器 Nylon | 13 mm, 0.45 μm 100/pk |
色譜柱及保護(hù)柱 | ||
99506 | Platisil CN色譜柱 | 150×4.6 mm，5 μm |
HPLC溶劑?緩沖鹽?離子對試劑 | ||
50102 | 甲醇 HPLC級 | 4 L |
50101 | 乙腈 HPLC級 | 4 L |
50117 | 二氯甲烷 HPLC級 | 4 L |
50144 | 甲酸 HPLC級 | 50 mL |
通用色譜產(chǎn)品 | ||
52401B | 瓶架/藍(lán)色 | 50孔 |
52401A | 瓶架/白色 | 50孔 |
1034 | 樣品瓶（棕色/螺紋） | 2 mL, 100/pk |
1035 | 樣品瓶蓋/含墊（已經(jīng)組裝） | 100/pk |
H80465 | HPLC 進(jìn)樣針 | 25 μL |
紅色產(chǎn)品貨號#30039、#30040、#1034、#1035*