探討PCR電泳無條帶原因

時(shí)間：2023/4/16閱讀：968

可能的原因及對(duì)應(yīng)的解決方案如下：

酶失活或在反應(yīng)體系中未加入酶。Taq DNA 聚合酶因保存或運(yùn)輸不當(dāng)而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結(jié)果。

模板含有雜質(zhì)。特別是對(duì)甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成 DNA 脫嘌呤而影響 PCR 的結(jié)果。

變性溫度是否準(zhǔn)確：PCR 儀指示溫度與實(shí)際溫度是否相符，過高酶在前幾個(gè)循環(huán)就迅速失活；過低則模板變性不底。

反應(yīng)系統(tǒng)中污染了蛋白酶及核酸酶，應(yīng)在未加 Taq 酶以前，將反應(yīng)體系 95℃ 加熱 5~10 分鐘。

引物變質(zhì)失效。人工合成的引物是否正確。是否純化，或因儲(chǔ)存條件不當(dāng)而失活。

引物錯(cuò)誤。利用 BLAST 檢查引物特異性或重新設(shè)計(jì)引物。

DNA 凝膠電泳時(shí)加入陽(yáng)性對(duì)照，確保不是 DNA 凝膠和 PCR 程序的問題。



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