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核酸被醇的沉淀
醇的沉淀，目標(biāo)是使核酸從裂解整體體系中沉淀下來(lái)，因此成功實(shí)現(xiàn)核酸與其他雜質(zhì)―主要是鹽―的離合。實(shí)際操作中，很多雜質(zhì)也會(huì)與核酸一塊兒被醇沉淀下來(lái)，特別是當(dāng)其他雜質(zhì)的液體濃度也比較高的時(shí)刻。醇的沉淀并不是十分特別優(yōu)異性的，不論什么有機(jī)大分子及一點(diǎn)鹽，當(dāng)液體濃度達(dá)到一定水準(zhǔn)后，都有可能同步被沉淀下來(lái)。
就核酸而言，標(biāo)準(zhǔn)的醇沉淀要求有一定的鹽及某一比例的醇用量，但這決不是說(shuō)鹽是必必需的還是醇的比例是不可以更改的。實(shí)際操作中不難發(fā)覺(jué)，當(dāng)裂解整體體系中核酸的液體濃度達(dá)到一定水準(zhǔn)后，縱然整體體系中不含課本中提議的鹽，單獨(dú)運(yùn)用醇也可以使核酸沉淀下來(lái)；還是包括鹽，運(yùn)用低比例的醇也可以使核酸沉淀下來(lái)(當(dāng)然，得率有可能會(huì)減低)。曉得這一點(diǎn)兒的意義在于：不要盲目信仰崇拜標(biāo)準(zhǔn)辦法的惟一性；相反，當(dāng)運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)辦法遇到問(wèn)題―主要是純凈度問(wèn)題―時(shí)，足以經(jīng)過(guò)調(diào)試沉淀?xiàng)l件來(lái)改善。zui有參照價(jià)值的是TRIzol 供給的一個(gè)沉淀方案：二分之一異丙醇加二分之一高鹽溶液代替*的異丙醇，可以大大減低多糖。額外一個(gè)問(wèn)題就是，要堅(jiān)決相信核酸的醇沉淀過(guò)程一樣也是其他雜質(zhì)的沉淀過(guò)程；調(diào)試醇沉淀的條件，固然會(huì)減低核酸的得率，培養(yǎng)箱但由于可以大大增長(zhǎng)純凈度。
假如核酸抽提的開(kāi)始樣品是比較“臟”的，原則上不要運(yùn)用低溫沉淀。低溫沉淀能增長(zhǎng)沉淀速率：當(dāng)核酸液體濃度很低時(shí)，效果表面化；當(dāng)核酸液體濃度比較高時(shí)，效果不表面化， 生化培養(yǎng)箱 但卻會(huì)造成雜質(zhì)的大大增加。
醇沉淀運(yùn)用異丙醇仍然酒精，我沒(méi)有發(fā)覺(jué)這二者對(duì)品質(zhì)有大的影響，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱固然人們“發(fā)覺(jué)”酒精沉淀的核酸純凈度更高。異丙醇沉淀的核酸比較緊湊密切，帖壁緊，顏色不是很白；酒精沉淀的核酸比較蓬松，容易從壁上移動(dòng)，顏色比較白。這是現(xiàn)象，提醒論斷：異丙醇沉淀的核酸不由得易遺失，但比較難蕩滌。接合丟不和睦蕩滌兩個(gè)方面綜合思索問(wèn)題，則提議：小量核酸用異丙醇沉淀(量少，蕩滌不是問(wèn)題，不遺失為先)，數(shù)量多核酸用酒精沉淀(量大，遺失不是問(wèn)題，蕩滌便捷為先)。至于異丙醇沉淀更容易沉淀下鹽的講法，我沒(méi)有遇到過(guò)(我?guī)缀醪贿\(yùn)用低溫沉淀，難不成低溫沉淀比較容易顯露出來(lái)鹽沉淀？)；我更感到顯露出來(lái)該現(xiàn)象的端由就在蕩滌的不*。
當(dāng)然，也不要遺忘異丙醇沉淀的zui大長(zhǎng)處是大小小，可以使絕大多的少量抽提操作在1.5ml 離心管內(nèi)完成。但因?yàn)槠涑恋砦锖芫o湊密切，蕩滌時(shí)那里面心局部不由得易被蕩滌到，所以，蕩滌異丙醇沉淀的核酸的關(guān)鍵是：必須要使沉淀懸浮起來(lái)，必須要安放時(shí)期使沉淀zui后成為蓬松的白的顏色。假如再蕩滌一次，品質(zhì)決不會(huì)有問(wèn)題的。恒溫培養(yǎng)箱
PEG、LiCl、CTAB 都可以用于核酸沉淀。固然他們遠(yuǎn)沒(méi)有醇沉淀的高運(yùn)用頻率，但卻各有*的地方。LiCl 可以沉淀RNA 以去除DNA ，CTAB 可以從含多糖的裂解整體體系中將核酸沉淀下來(lái)。
