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嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測定
閱讀：989 發(fā)布時間：2011-7-12
嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測
（乙酰氯—甲醇甲酯化法）
一、原理
乙酰氯與甲醇反應(yīng)得到的鹽酸—甲醇使試樣中的脂肪和游離脂肪酸甲酯化，用甲苯提取后，經(jīng)氣相色譜儀分離檢測，外標法定量。
本方法依據(jù)《食品安全國家標準GB 5413.27—2010嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測定》方法中規(guī)定。
二、儀器和設(shè)備
1.萬分之一電子天平
2.恒溫熱水浴槽
3.離心機：轉(zhuǎn)速≥5000 轉(zhuǎn)/分鐘，離心管：50mL
4.GC-L6氣相色譜儀，帶FID 檢測器，毛細管分流/不分流進樣及尾吹系統(tǒng)
5.冷凍干燥儀
6.LF-12氮吹儀
7. PC2560毛細管柱（100*0.25*0.20）
三、試劑：
1.無水碳酸鈉
2.甲苯
3.乙酰氯
4.乙酰氯甲醇溶液
5.碳酸鈉溶液
6.脂肪酸甘油三酯標準品：純度≥99 %
四、分析步驟
1.試樣處理
試樣含水量大于5%時，冷凍干燥至含水量小于5%。
稱取試樣0.5 g（到0.1 mg）于15 mL 干燥螺口玻璃管中，加入5.0mL甲苯。
稱取無水奶油試樣0.2g（到0.1mg）于15mL干燥螺口玻璃管中，加入5.0mL甲苯。
2.甲酯化提取
2.1試樣測定液的制備
在試樣中加入10%乙酰氯甲醇溶液6.0mL，充氮氣后，旋緊螺旋蓋，振蕩混合后于80℃±1℃水浴中放置2h，期間每隔20min取出振搖一次，水浴后取出冷卻至室溫。將反應(yīng)后的樣液轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，分別用3.0mL碳酸鈉溶液清洗玻璃管三次，合并碳酸鈉溶液于50mL離心管中，混勻，5000 轉(zhuǎn)/分鐘離心約5min。取上清液作為試液，氣相色譜儀測定。
2.2標準測定液的制備
準確吸取脂肪酸甘油三酯標準工作液0.5mL于15mL螺口玻璃管中，加入4.5mL甲苯，其他操作步驟同2.1。
五、色譜參考條件
色譜柱：PC2560100m×0.25mm，0.20um
氣源：氮氣（99.999%）、氫氣（99.999%）、空氣（99.999%）
載氣流速：1.0mL/min
進樣口溫度：260℃
分流比：30：1
檢測器溫度：280℃
柱溫箱溫度：初始溫度140℃，保持5min，以4℃/min升溫至240℃，保持15min
進樣量：1.0μL
六、試樣溶液的測定
分別準確吸取1.0μL脂肪酸標準測定液及試樣測定液注入色譜儀，平行測定次數(shù)不少于兩次，以色譜峰峰面積定量。
七、分析結(jié)果的表述
1.試樣中各脂肪酸的含量的計算
試樣中各脂肪酸的含量按公式（1）計算：
式中：
X i—— 試樣中各脂肪酸的含量，單位為毫克每百克（mg/100 g）；
Asi—— 試樣測定液中各脂肪酸的峰面積；
mstdi——在標準測定液的制備（6.2.2）中吸取的脂肪酸甘油三酯標準工作液中所含有的標準品的
質(zhì)量, 單位為毫克（mg）；
Fj——各脂肪酸甘油三酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的換算系數(shù)，參見附錄A 中的表A.1；
Astdi ——標準測定液中各脂肪酸的峰面積；
m ——試樣的稱樣質(zhì)量，單位為克（g）。
以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
2.試樣中總脂肪酸的含量計算
試樣中總脂肪酸的含量按公式（2）計算：
式中：
XTotal FA——試樣中總脂肪酸的含量，單位為毫克每百克（mg/100 g）；
Xi ——試樣中各脂肪酸的含量，單位為毫克每百克（mg/100 g）。
以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
3.試樣中某個脂肪酸占總脂肪酸的百分比（%）的計算
試樣中某個脂肪酸占總脂肪酸的百分比（%）Y 按公式（3）計算：