西尼羅河病毒熒光玻片法檢測試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

檢查

1.實驗室檢查

白細胞數(shù)減少，腦炎型者腦脊液中淋巴細胞增多，蛋白增高。

2.免疫學檢查

利用血清學抗體檢測方法，常用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附實驗）法，采用患者急性期和恢復期雙份血清，兩份血清同時進行檢測，以恢復期血清較急性期特異性IgG抗體滴度升高4倍以上為陽性，有助于本病的診斷。

3.病原學檢查

自潛伏末期至發(fā)病后第5天，從患者血液或腦脊液中分離出病毒，陽性率較高，對新分離病毒的鑒定一般采用已知血清進行中和實驗。

4.分子生物學檢查

RT-PCR（逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)）法檢測，通過設(shè)計西尼羅河熱病毒特異引物對血清或腦脊液標本進行RT-PCR試驗，陽性率高，具有特異性診斷價值。

用途

西尼羅(WN)病毒IgG ELISA，利用了西尼羅重組抗原檢測人體血清或血漿中的西尼羅抗體。本實驗僅用于輔助診斷人感染了西尼羅病毒，不用于篩查血液或血液成分。僅供專業(yè)人員體外診斷使用。

概述

 感染了西尼羅病毒會導致包括腦炎等一系列癥狀的疾病，西尼羅病毒在世界廣泛傳播，已在50多個國家檢測出該病毒。本試驗經(jīng)CDC提供的試劑檢驗與驗證。本試驗使用了一種稱為WNRA的重組抗原，它可以作為西尼羅病毒感染的快速血清學指標，WNRA蛋白是一種重組抗原，它是由含有西尼羅病毒兩個抗原的序列多肽構(gòu)成。

實驗的原理

檢測西尼羅病毒IgG ELISA 是基于兩步夾心法原理制造的。

提供的材料

• 微孔板（96孔 12x8）：即用  每孔均包被結(jié)合西尼羅重組抗原的單抗。2－8℃下保存至保質(zhì)期。

注意：WNRA和NCA已包被于微孔板。

• IgG樣品稀釋液：1支 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。
• IgG陰性質(zhì)控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要長時間儲存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲存。
• IgG陽性質(zhì)控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要長時間儲存，將其分裝于小瓶里，在-70℃下儲存。
• 洗滌液（10X）：1瓶 120ml  2－8℃下保存至使用。
• EnWash：1瓶 20ml 2－8℃下保存至使用。
• 酶聯(lián)物：一瓶6ml 即用 2－8℃下保存至使用。
• TMB底物液： 1支 9ml 即用  2－8℃下保存至使用。
• 終止液；1支6ml 即用  2－8℃下保存至使用。

試劑應(yīng)避免反復凍融。

西尼羅河病毒熒光玻片法檢測試劑盒

操作步驟：

• 標記將要使用的板條，注意微孔板已經(jīng)按照統(tǒng)一排列，如下所述包被西尼羅抗原和質(zhì)控抗原。

• 將血清樣品﹑陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控同樣地用樣每孔加入50ul稀釋后的樣品，以下為一個血清樣品使用一個板條的*。
• 品稀釋液按1：300稀釋。

• 封板，在濕潤的溫育器里37℃下溫育1小時。
• 溫育后，用自動洗板機，使用洗滌液洗板6次。
• 在每孔中加入50ul的酶聯(lián)物。
• 封板，在濕潤的溫育器里37℃下溫育1小時。
• 溫育后，用自動洗板機，使用洗滌液洗板6次。
• 每孔加入150ul的EnWash，在室溫下溫育5分鐘
• 溫育后，用自動洗板機，使用洗滌液洗板6次。
• 每孔加入75ul的TMB底物液。
• 封板，在室溫下，避光處溫育10分鐘。
• 每孔加入50ul的終止液終止反應(yīng)。
• 在450nm處讀取吸光率。

結(jié)果的計算

結(jié)果的變化將會非常大，以下結(jié)果僅供指引。

計算ISR值：

計算在同一實驗里WNR抗原的兩個陰性質(zhì)控的平均值，計算同一實驗里NC抗原的兩個陰性質(zhì)控的平均值，用WNRA/NCA，得出陰性質(zhì)控的ISR值。同樣地計算陽性質(zhì)控和樣品得ISR值，陽性質(zhì)控的ISR值應(yīng)高于3.0，陰性質(zhì)控的ISR值應(yīng)低于1.5。

結(jié)果的判斷：

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若于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，呈均勻混濁，后期  可因產(chǎn)生自溶而變得澄清。甲型溶血性鏈球菌不產(chǎn)生自溶  酶，故加入膽鹽等表面活性劑不能溶解，利用此特點可鑒  別甲型溶血性鏈球菌與肺炎鏈球菌。肺炎鏈球菌在血瓊脂  平板上菌落周圍形成α溶血環(huán)。細菌生長的能量來源于分  解葡萄糖，伴隨乳酸的形成。乳酸的堆積會抑制細菌的生  長，故間斷性加入堿可使肺炎鏈球菌大量繁殖。Optochin  可抑制肺炎鏈球菌生長。該菌可分解多種糖類，產(chǎn)酸不產(chǎn)  氣。膽汁溶解試驗陽性、Optochin敏感試驗陽性。大多數(shù)  新分離出的肺炎鏈球菌可發(fā)酵菊糖，故菊糖發(fā)酵試驗在鑒  別肺炎球菌與甲型溶血性鏈球菌時有一定的參考價值。抗  原構(gòu)造編輯莢膜多糖抗原存在于肺炎鏈球菌莢膜中。根據(jù)  莢膜多糖抗原性的不同將肺炎球菌分為91個血清型。菌體  抗原⑴C多糖：存在于肺炎鏈球菌細胞壁中，具有種特異性  ，為各型菌株所共有。C多糖可被血清中C-反應(yīng)蛋白沉淀。  在鈣離子存在時，C多糖可與正常人血清中稱為C-反應(yīng)蛋白  （C reactive protein,CRP）的β球蛋白結(jié)合，發(fā)生沉淀  。⑵M蛋白：具有型特異性。