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  程：     

黃曲霉毒素B1（AFB1）酶聯(lián)免疫定量檢測試劑盒使用說明

方法編號：CDC-5511

本測試盒用間接競爭免疫分析法定量測定谷物中AFB₁。該測試盒反應(yīng)孔可拆卸，可測單份樣品，也可測多份樣品。定量分析時需有含450nm波長的微孔板酶標(biāo)儀。

1 概要

黃曲霉毒素是由曲霉菌屬的黃曲霉和寄生曲霉等產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，主要污染玉米、花生、堅果等。天然污染的黃曲霉毒素以AFB₁為主，AFB₁屬于強烈致癌物質(zhì)，肝臟是其主要的靶器官，具有*的急性毒性和致癌性。

AFB₁檢測方法主要有薄層色譜法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC）和ELISA方法，本試劑盒是以應(yīng)用單克隆抗體為基礎(chǔ)的ELISA檢測方法，可以準(zhǔn)確快速檢測糧谷類和花生及飼料中的AFB₁。

2 測定原理

本試劑盒采用固相酶聯(lián)免疫吸附原理，利用間接競爭ELISA法進行測定。用抗原包被微孔板，加入AFB₁標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、抗AFB₁單克隆抗體進行孵育后，將未與包被抗原結(jié)合的抗體洗去；再加入酶標(biāo)記的抗鼠IgG抗體孵育，加入顯色液，經(jīng)過終止液終止后，用酶標(biāo)儀在450nm處測定OD值。

3 提供的物品

----微孔板…………………………………………………………… 包被有AFB₁-BSA

----5個濃度的AFB₁標(biāo)準(zhǔn)溶液（各0.5mL）

標(biāo)準(zhǔn)1：0ng/mL…………………………………………………………….直接使用

標(biāo)準(zhǔn)2：0.1ng/m…………………………………………………………….直接使用

標(biāo)準(zhǔn)3：0.2ng/mL ………………………………………………………….直接使用

標(biāo)準(zhǔn)4：0.5ng/m………………………………………………….…………直接使用

標(biāo)準(zhǔn)5：1.0ng/m………………………………………….…………………直接使用

----抗AF B₁單克隆抗體溶液（6mL）……………………………………………直接使用

----酶標(biāo)物（12mL）..………………………………………………………………直接使用

----顯色液（12mL）..………………………………………………………………直接使用

----終止液（6mL）…………………………………………………………………直接使用

----濃縮洗液（30mL）..……………………………………………………………稀釋使用

4 盒中未提供，需自備物品

----微孔板酶標(biāo)儀（可于450nm處測定）、振蕩器、粉碎機、微量移液器

----量筒、漏斗、容量瓶、快速定性濾紙

----氯化鈉（分析純）、甲醇（分析純）、去離子水或蒸餾水

5 操作者注意事項

       ----標(biāo)準(zhǔn)溶液中含有黃曲霉毒素，應(yīng)特別小心。

----使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液用pH7的次氯酸溶液（10%v/v）浸泡過夜。

----終止液含有硫酸，避免接觸皮膚。

----每次加樣后立即將所有試劑放回2~8 ℃。

----每步加樣時間應(yīng)控制在5min內(nèi)。

----孵育過程中應(yīng)避光。

----不要使用過期試劑盒。

       ----不要交叉使用不同批號的試劑盒中的試劑。

6 儲存條件

       ----保存試劑盒于2~8℃。不要冷凍.

       ----顯色液對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

       ----將不用的微孔板放進原鋁箔袋中，置2~8℃保存。

7 試劑變質(zhì)的標(biāo)志

       ----標(biāo)準(zhǔn)1的吸光度值小于0.5個單位（A_450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。

8 樣品處理

----樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存。

----取5g粉碎的有代表性的樣品，加1.25g氯化鈉及25mL70%甲醇-水溶液。

----強力振蕩3分鐘。

----用快速定性濾紙過濾。

----取1mL濾液，加水4mL進行稀釋。

----取50μL稀釋液進行分析。

----*根據(jù)需要可以增減樣品量，但甲醇-水溶液的量也應(yīng)相應(yīng)增減。