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            上海撫生實業(yè)有限公司>>滴定緩沖溶液>>蛋白電泳>>Tris-甘氨酸電泳緩沖液

            Tris-甘氨酸電泳緩沖液

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            • 所在地 上海市

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            更新時間:2022-08-30 11:33:59瀏覽次數(shù):293

            聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

            產(chǎn)品簡介

            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 500ml
            貨號 FS-R7487 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
            主要用途 僅供科研 貨號 FS-R7487
            Tris-甘氨酸電泳緩沖液公司正在銷售的產(chǎn)品:Anti-TRIM24 Antibody人長效甲狀腺
            Anti-TRIM25 Antibody大鼠白介素18
            Anti-TRIM38 Antibody人腎上腺髓質(zhì)素
            Anti-TRIM68 Antibody小鼠白介素10
            Anti-TRIP13 Antibody人反應(yīng)性生長
            Anti-TRMT11 Antibody大鼠胰島素樣生長因子2
            Anti-TR

            詳細(xì)介紹

            公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!

            產(chǎn)品名稱

            規(guī)格

            貨號

            Tris-甘氨酸電泳緩沖液

            500ml

            FS-R7487

            產(chǎn)品分類:蛋白電泳

            儲存條件:室溫,12個月

            用途:常用電泳緩沖液,尤其適用于SDS-PAGE電泳

            注意事項:主要由Tris、甘氨酸、SDS等組成

            63.jpg 

             

            配制與標(biāo)定的實驗原理:

            1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;

            EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

            2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。

            配制步驟:

            1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。

            2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。

            3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。

            13.jpg 

             

            實驗方法與判定:

            1.對照品溶液的穩(wěn)定性

            2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。

            3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。

            4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

            灰樹花磷化血小板源性生長因子受體αAnti-CD209 AntibodyAgouti相關(guān)蛋白(AGRP)

            果蠅克魯維酵母兒茶氧化PPO抗體Anti-CD24 AntibodyAFG3樣蛋白2(AFG3L2)

            云芝蛋白激C抗體Anti-CD244 AntibodyAdropin(ENHO)

            白囊耙齒菌脂滴包被蛋白Perilipin-A抗體Anti-CD244 AntibodyADP-核糖基化因子5(ARF5)

            王氏薄孔菌多聚腺苷結(jié)合蛋白抗體Anti-CD274 AntibodyADP-核糖基化因子4(ARF4)

            焦瑞身氏溶桿菌核纖層蛋白A相關(guān)結(jié)構(gòu)蛋白1抗體Anti-CD274 AntibodyADAM金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白1基元4(ADAMTS4)

            冷彎曲菌PCID2蛋白抗體Anti-CD2AP AntibodyⅣ型前膠原肽(PⅣNP)

            三葉草根瘤菌腺苷硫激1抗體Anti-CD27 Antibody(PB0974)Ⅳ型前膠原基末端肽(PⅣNP)

            謝瓦散囊菌腺苷硫激2抗體Anti-CD2AP AntibodyⅣ型膠原(Col Ⅳ)

            Winogradskyella multivorans 蛋白激活受體3抗體Anti-CD274 AntibodyⅣ型膠原(Ⅳ-C)

            黑曲霉MAWD結(jié)合蛋白抗體Anti-CD274 AntibodyⅢ型前膠原肽(PⅢP)

            蠟樣芽孢桿菌PCID1蛋白抗體Anti-CD2AP AntibodyⅢ型前膠原肽(PⅢNP)

            黑姬菇PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK6蛋白抗體Anti-CD30/TNFRSF8 AntibodyⅢ型前膠原基末端肽(PⅢNP)

            白橙蓋鵝膏菌吡哆激抗體Anti-CD33 AntibodyⅢ型前膠原基端肽(PⅢNT)

            黃溶鏈霉菌PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK1蛋白抗體Anti-CD34 AntibodyⅢ型前膠原C端肽(PⅢCP)

            Sphingomonas yunnanensis前列腺癌激活蛋白抗體Anti-CD33 Antibody(PB0975)Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)

            小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

            : AS1.196資源名稱: 蠟狀芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

            白假絲酵母Candida│albicans 質(zhì)量規(guī)格:>98%(T),BR
            Tris-甘氨酸電泳緩沖液ADAM-TS7/FITC  熒光su標(biāo)記整合su樣金屬蛋白mei與凝血mei1型-7IgG規(guī)格: 0.2ml

            14-3-3 family protein/FITC  熒光su標(biāo)記植物14-3-3蛋白IgG規(guī)格: 0.2ml

            ADAM-TS7/FITC  熒光su標(biāo)記兔抗人、大、小鼠整合su樣金屬蛋白mei與凝血mei1型-7(N端)IgG規(guī)格: 0.2ml

            ADAM-TS12/FITC  熒光su標(biāo)記整合su樣金屬蛋白mei與凝血mei1型-12IgG規(guī)格: 0.2ml

            ACV-A/FITC  熒光su標(biāo)記活化suAIgG規(guī)格: 0.2ml

            使用方法:

            1.  常用篩選濃度

            注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。

            一般而言,哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

            2. 殺滅曲線的建立

            注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。

            1)  第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,可增加接種量。

            2)  根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

            3)  第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

            4)  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

            5)  按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

            3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

            1)  轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。

            注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

            2)  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

            3)  篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。

            4)   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

            5)   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

             


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