細(xì)胞名稱

 MHCC-97H人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞

種屬

人

組織來源

肝

生長(zhǎng)狀態(tài)

貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)

上皮樣

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基類型：DMEM（Hyclone SH30243.01)培養(yǎng)基

FBS（德國(guó)SERANAS-FBS-SA-015): 10%

抗生素：雙抗

培養(yǎng)條件：37℃，CO2: 5%

傳代方法

收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)：

如果沒長(zhǎng)滿，將培養(yǎng)瓶用75%酒精消毒后在超凈臺(tái)內(nèi)更換新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿（約80%-90%）則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。

貼壁細(xì)胞傳代方法：

1 棄去培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。

2 加1ml 0.25%的胰酶（含0.02%EDTA），讓胰酶與大部分細(xì)胞接觸后放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，隨時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài)變化，待細(xì)胞大部分變圓后加*培養(yǎng)基終止消化。

懸浮細(xì)胞傳代方法：可以直接傳代也可以離心法傳代。

1 直接傳代是讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3，吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

2離心法傳代是將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)， 1000rpm，5分鐘，去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，吹打細(xì)胞形成細(xì)胞懸液后，分別接種到其他培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

 一般沒有特殊說明，細(xì)胞一般是一傳二。

凍存方法

70% *培養(yǎng)基，20%FBS，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

儲(chǔ)存：液氮中長(zhǎng)期保存。

注

1 觀察細(xì)胞在低倍鏡下觀察，便于整體估計(jì)細(xì)胞密度。

2 在運(yùn)輸過程中可能會(huì)導(dǎo)致一些貼壁不牢的細(xì)胞發(fā)生部分脫落，可離心吹打后重新種入瓶中培養(yǎng)。

3 收到細(xì)胞后若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、細(xì)胞污染等，請(qǐng)拍照并在三天內(nèi)與我們。

試管規(guī)格

細(xì)胞量

細(xì)胞取樣

0.4%臺(tái)盤蘭

PBS（1×）

稀釋倍數(shù)

1.5ml

0.5-1×10⁶

10μl

10μl

-

2

2ml

0.5-1×10⁶

10μl

10μl

-

2

5ml

5×10⁶

10μl

10μl

-

2

15ml

10×10⁶

10μl

10μl

-

2

15ml

15-20×10⁶

10μl

10μl

80μl

10

50ml

30-100×10⁶

10μl

10μl

80μl

10