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            95-C細胞株

            時間:2016-5-19閱讀:880

            95-C細胞株

             

            細胞培養(yǎng)

            1、冷凍管應如何解凍?

            取出冷凍管后, 須立即放入37 水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化, 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時, 必須注意安全, 預防冷凍管之爆裂。

            2、細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時, 是否應馬上去除DMSO?

            除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細胞外, 絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞), 在解凍之后, 應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中, 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。

            3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?

            不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細胞大都無法立即適應, 造成細胞無法存活。

            4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?

            不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源, 所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

            5、何謂FBS, FCS, CS, HS ?

            FBS (fetal bovine serum) FCS (fetal calf serum) 是相同的意思, 兩者都是指胎牛血清, FCS 乃錯誤的使用字眼, 請不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。

            6、培養(yǎng)細胞時應使用5 % 10% CO2?或根本沒有影響?

            一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng), 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2 濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時,細胞培養(yǎng)時應使用10 % CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時, 則應使用5 % CO2 培養(yǎng)細胞。

            7、何時須更換培養(yǎng)基?

            視細胞生長密度而定, 或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。

            8、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素?

            除于特殊篩選系統(tǒng)中外, 一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下, 培養(yǎng)基中不應添加任何抗生素。

            9、附著性細胞繼代時所使用之trypsin-EDTA 濃度?應如何處理?

            一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。*次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中, 保存于–20 ,避免反復冷凍解凍造成trypsin 之活性降低, 并可減少污染之機會。

            10、懸浮性細胞應如何繼代處理?

            一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中, 稀釋細胞濃度即可, 若培養(yǎng)液太多時, 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高, 直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶, 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度, 重復前述步驟即可。

             

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