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            上海慧穎生物科技有限公司

            BT-325細(xì)胞系

            時間:2016-5-19閱讀:661

            BT-325細(xì)胞系

             

            原代細(xì)胞傳代技術(shù)

            一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代 
            1、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。
            2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動培養(yǎng)瓶,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
            3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時,棄去消化液,加入培養(yǎng)液終止消化。
            4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中,置37培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。

            二、懸浮細(xì)胞的傳代 
            1、直接傳代
            讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3。
            用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后,分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中,置37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
            2、離心法傳代
            將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),離心800-1000rpm,5分鐘。
            去除上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),用吸管吹打使之形成細(xì)胞懸液。
            將細(xì)胞懸液分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中,置37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

            牙髄細(xì)胞的傳代

            牙髄細(xì)胞中主要是成纖維細(xì)胞,貼壁生長。

            傳代方法:

            棄培養(yǎng)液(盡量吸干)

            加基礎(chǔ)培養(yǎng)基配置的0.2%trypsin+0.02%EDTA

            輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶使消化液浸過有細(xì)胞的瓶壁

            重復(fù)45

            迅速吸去消化液

            鏡下觀察細(xì)胞變圓回縮(約1分鐘)

            加入*培養(yǎng)液(DMEM+10% FCS)終止反應(yīng)

            吹打后,1:2接種,繼續(xù)培養(yǎng)。

            大鼠系膜細(xì)胞傳代

            我用的是DMEM低糖培養(yǎng)液,每次傳代前,將培養(yǎng)液,PBS0.25%的胰酶(沒加edta,37度烤箱預(yù)熱(此做法是減少4度的涼液體對細(xì)胞的刺激,以防細(xì)胞死亡)。

            每次換液時,一定要燒培養(yǎng)瓶口,做好無菌觀念。

            先拋棄舊液,用PBS先沖凈殘留的血清,再加PBS用滴管輕輕的吹打細(xì)胞,將死細(xì)胞吹打掉。

            加胰酶時注意:若用加edta的,記住了,在鏡下看到細(xì)胞在收縮時,趕快吸出胰酶,加血清中止消化。血清可抑制胰酶的活性,但對edta無效。前后大概不到10秒。若用沒有加edta的,時間要適當(dāng)延長,看到細(xì)胞變?yōu)橛辛Ⅲw感時,加血清,輕輕拍打,細(xì)胞就會散開。若團(tuán)塊大,可用滴管吹打。

            動作一點要快,不能讓細(xì)胞離開培養(yǎng)箱時間太長。

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