Invitrogen TRIZOL說明書/價格（貨號：15596026）

產(chǎn)品名稱：Invitrogen TRIZOL、Trizol Reagent、一步法總RNA提取試劑

品牌：Invitrogen 

貨號：15596026 （100ML）和15596018（200ML）

產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：可快速簡單地獲得高純度總RNA

特惠價格：900元/瓶（100ML）；1700元/瓶（200ML）

保存溫度：2-8度

效期：4度保存可2年

用途：TRIZOL試劑純化的RNA可用于PCR、RNA印跡分析、poly（A）+篩選或斑點(diǎn)雜交。純化的DNA和蛋白質(zhì)分別適用于DNA和蛋白質(zhì)印跡分析。

Invitrogen TRIZOL說明書：

從細(xì)胞中提取總RNA 

1） 培養(yǎng)貼壁細(xì)胞：不須消化，可直接用Trizol進(jìn)行消化、裂解，Trizol體積按10cm2/ml比例加入。 

2） 懸浮細(xì)胞可直接收集、裂解，每1ml Trizol可裂解5×106動物、植物或酵母細(xì)胞，或107細(xì)菌細(xì)胞。

從組織中提取總RNA 

1）液氮研磨，組織塊直接放入研體中，加入少量液氮，迅速研磨，待組織變軟，再加少量液氮， 

再研磨，如此三次，按50-100mg組織/mlTrizol加入Trizol，轉(zhuǎn)移入離心管進(jìn)行第2步操作。 

2） 勻漿：組織樣品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol，另外，組織體積不能超過Trizol體積 

的10%，否則勻漿效果會不好，用電動勻漿器充分勻漿約需1-2分鐘。 

2．細(xì)胞或組織加Trizol后，室溫放置5min，使其充分裂解。注：此時可放入-70℃長期保持。 

3．12000rpm 離心5min，棄沉淀。 

4．按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，振蕩混勻15分鐘，室溫放置15min。注：禁用漩渦振蕩器， 

以免基因組DNA斷裂。 

5．4℃12000g離心15min。 

6．吸取上層水相，至另一離心管中。 

注：1）千萬不要吸取中間界面。 

2）若同時提取DNA和蛋白質(zhì)，則保留下層酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，則棄下層酚相。 

7．按0.5ml異丙醇/ml Trizol 加入異丙醇混勻，室溫放置5-10min。 

8．4℃ 12000g離心10min，棄上清，RNA沉于管底。 

9．按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇，溫和振蕩離心管，懸浮沉淀。 

10．4℃ 8000g離心5min，盡量棄上清。 

11．室溫晾干或真空干燥5-10min。 注：RNA樣品不要過于干燥，否則很難溶解。 

12．可用50ul H2O，TE buffer或0.5%SDS溶解RNA樣品，55-60℃5-10min。 

注：H2O、TE或0.5%SDS均須用DEPC處理并高壓。 

12、測O.D值定量DNA濃度。 

注：1）此方法提取RNA A260/A280值在1.6-1.8之間。 

2） 產(chǎn)率估計：組織標(biāo)本：（ug RNA/mg組織）1-10ug，培養(yǎng)細(xì)胞（ug RNA/106 Cell）：5-15ug。 

注：1、組織或細(xì)胞量過少，可酌情減少Trizol用量。 

2、組織或細(xì)胞用量過多，會引起DNA對RNA的污染。 

3、高蛋白，脂肪或多糖類組織，肌肉組織或塊狀植物組織等，組織勻漿或液氮研磨 

后須4℃ 1200離心10min去掉不溶物，再進(jìn)行下面操作，若頂層有脂肪物，則 

也須去掉。 

4、熱天提RNA，帶手套是必須的，手是RNase的主要來源。 

5、組織塊用液氮研磨，效果，若沒有液氮或電動勻漿器，可用手動勻漿器代替， 

此時組織塊不宜過大，且需先用眼科剪將組織絞碎，然后再充分研磨。