豬Pro IL-18 ELISA試劑盒

豬前體Pro白介素18（IL-18）ELISA試劑盒原理/說明書

廠家：上?；鄯f生物科技有限公司

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：1242635944（試劑之城）

產(chǎn)品貨號： EIA06986

使用前*閱讀說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術原理，能測量豬Pro IL-18，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學診斷。

試劑盒原理

白細胞介素18 （白介素-18 ）是一個家族因子，白細胞介素18是一種能誘導IFN－γ產(chǎn)生的新型細胞因子。它的功能相似白細胞介素12 。它具有多種生物學功能，能促進T細胞增殖，增強NK細胞的細胞毒作用，在誘導Th1細胞的分化成熟過程和Th1細胞為主的細胞免疫反應中具有促進和調(diào)節(jié)作用。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關。

試劑盒組成部分（96T）

需要而未提供的試劑和器材

1． 37℃恒溫箱。

2． 標準規(guī)格酶標儀。

3． 自動洗板機。

4． 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。

5． 蒸餾水，容量瓶等

6． 干凈的試管和Eppendof管。

注意事項

1． 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。

2． 配制各種試劑時，切記混勻！

3． 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。

4． 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。

5． 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活！

6． 為免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和試管。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。

自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

樣品的準備和保存

樣品如果不立即分析，應分裝后冷凍保存，且避免反復凍融。

血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固2小時或4℃過夜，離心1000×g 10分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

細胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

樣品稀釋的一般原則

用戶須查閱文獻了解標本內(nèi)待測因子的含量，決定適當?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的*檢測范圍。樣品的稀釋應有詳細記錄。

試劑的準備和保存

A. 標準品的稀釋和使用：在使用前2小時內(nèi)準備。將凍干品管內(nèi)加入1ml樣品稀釋液，*溶解后做倍比稀釋。稀釋后的標準品在2小時內(nèi)使用。

B．生物素標記抗體工作液：在使用前2小時內(nèi)準備。

1． 根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量（實際配制時應多配制0.1-0.2ml）。

2． 按10ul生物素標記抗體加抗體稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

C．親和素-過氧化物酶復合物（ABC）工作液的準備：在使用前1小時內(nèi)準備。

1． 根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量（實配時應多配制0.1-0.2ml）。

2． 按10ul親和素-過氧化物酶復合物（ABC）加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

D.  TMB顯色工作液的準備：在使用之前30分鐘，按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液。

操作程序

1． 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目。

2． 將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔加入。

3． 酶標板加上蓋，37℃反應90分鐘。

4． 反應后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體；或甩去酶標板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。

5． 將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應60分鐘。

6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。

7． 將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應30分鐘。

8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。

9． 按每孔0.09ml依次加入已在37℃平衡30分鐘的TMB顯色液，37℃避光反應，反應過程中，要經(jīng)常的觀察，當肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應zui長不要超過30分鐘）。

10． 用酶標儀在450nm測定O.D.值。

11． 根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應該×N。

操作程序總結：

準備試劑，樣品和標準品 

加入準備好的樣品和標準品，37℃反應90分鐘 

洗板2次，加入生物素化抗體工作液，37℃反應60分鐘

洗板3次，加入ABC工作液，37℃反應30分鐘

洗板5次，加入TMB顯色液，37℃反應

加入TMB終止液

30分鐘之內(nèi)讀OD值

計算標本待測因子含量

檢測范圍：1000pg/ml→15.6pg/ml。

敏感性：  ＜2pg/ml

特異性：  系統(tǒng)和其它細胞因子無交叉反應。

保存：    -20℃ [短期內(nèi)（如兩周）可4℃]

有效期：  12個月（-20℃）。

用途：    用于體外定量分析液體標本（通用型）。

References: 

1. Okamura H., et al. Nature 378, 88-91 （1995）  

2. Ushio S., et al. J. Immunol. 156, 4274-4279 （1996）  

3. Micallef M., et al. Eur. J. Immunol. 26, 1647-1651 （1996）  

4. Tao D, et al. Cell Immunol. 173, 230-235 （1998）  

5. M. Taniguchi, et al. J. Immunol. Methods 206, 107-113 （1997）