Qiagen試劑盒203203/203205/203207/203209

高特異性擴增，所需優(yōu)化次數(shù)少

• 所需優(yōu)化次數(shù)少

• PCR特異性高

• 操作方便，可在室溫下構(gòu)建反應體系

不同于抗體介導的方法，HotStarTaq DNA Polymerase應用化學介導的熱啟動，可確保聚合酶在PCR初始加熱階段*沒有活性。HotStarTaq DNA Polymerase提供*的QIAGEN PCR Buffer，將非特異性擴增產(chǎn)物、引物二聚體和其他污染降至**。一種新型的添加劑Q-Solution，可實現(xiàn)難擴增的模板（如GC含量高的模板）高效擴增。

Performance

每一批HotStarTaq DNA Polymerase都經(jīng)過*的質(zhì)量控制測試，包括：嚴格的PCR特異性和具有可重復性的試劑，即使低拷貝的靶分子也可擴增。通過檢測，HotStarTaq DNA Polymerase可確保高度特異性和在熱啟動PCR中的表現(xiàn)（參見"Higher specificity with different primer–template systems"、"Superior performance"和表格）。該試劑盒提供的新型PCR緩沖液使得在多種PCR條件下都維持高特異性，無需優(yōu)化（參見"Tolerance to variable magnesium concentration"）。試劑盒中的Q-Solution可進一步優(yōu)化PCR（參見"Amplification of difficult templates"）?？傊?，這些組合確保了在多種應用中的特異性擴增（參見"Effect of hot start on RT-PCR performance"和"Highly sensitive single-cell PCR"）。

Qiagen試劑盒203203/203205/203207/203209

HotStarTaq DNA Polymerase特性

濃度：5 units/µl
重組酶：是
底物類似物：dNTP、ddNTP、dUTP、biotin-11-dUTP、DIG-11-dUTP、fluorescent-dNTP/ddNTP
延伸速度：72°C條件下2–4 kb/min
酶半衰期：97°C條件下10 min，94°C條件下60 min
擴增效率：≥10⁵倍
5'–>3'外切酶活性：是
額外添加A：是
3'–>5' 外切酶活性：否
核酸酶污染：否
蛋白酶污染：否
RNases污染：否
自啟活性：否

Qiagen203203/203205/203207/203209

Principle

HotStarTaq DNA Polymerase，一種經(jīng)修飾的Taq DNA Polymerase，確保熱啟動PCR的高度特異性。該試劑盒包括新型的雙陽離子PCR緩沖液、Q-Solution和MgCl₂。

HotStarTaq DNA Polymerase

HotStarTaq DNA Polymerase以非活性形式提供，常溫下沒有聚合酶活性。避免PCR構(gòu)建和循環(huán)初始階段低溫條件下非特異性引物的延伸和引物二聚體的形成（參見"Superior performance in hot-start PCR"和"Higher specificity with different primer–template systems"）。95°C條件下孵育15分鐘即可激活HotStarTaq DNA Polymerase，這個步驟可整合入已有的熱循環(huán)程序中。

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer通過提高每個PCR擴增退火過程特異性引物的結(jié)合比例，確保PCR每個循環(huán)特異性擴增（參見"Increased specificity of primer annealing"）。*的KCl和(NH₄)₂SO₄平衡組合，使得該緩沖液與傳統(tǒng)的PCR緩沖液相比在很寬的溫度和Mg²⁺濃度范圍內(nèi)都有嚴格的引物退火條件和高度的特異性，無需進行耗時的優(yōu)化（參見"Tolerance to variable magnesium concentration"）。

Q-Solution

該產(chǎn)品同時提供Q-Solution，一種新型的PCR添加劑，通過更改DNA熔解行為促進難擴增模板的擴增。這種*的試劑可進一步優(yōu)化由模板引起的表現(xiàn)不理想的PCR，如過多的二級結(jié)構(gòu)和富含GC的模板（參見"Amplification of difficult templates"）。不同于DMSO和其他PCR添加劑，Q-Solution的濃度是確定的，沒有*性，并且保證PCR的純度。而且PCR中加入Q-Solution不會影響PCR的準確性。

Procedure

HotStarTaq DNA Polymerase提供高效、經(jīng)優(yōu)化的實驗方案，用于快速、方便的構(gòu)建PCR反應體系。95°C條件下孵育15分鐘激活HotStarTaq DNA Polymerase，可以整合入已有的熱循環(huán)程序。反應可在室溫下建立，更加方便和易于使用（參見"HotStarTaq procedure"）。

Applications

HotStarTaq DNA Polymerase適合多種應用，包括各種富有挑戰(zhàn)性的研究，如各種擴增應用：

• 復雜的基因模板

• 復雜的cDNA模板（如RT-PCR）

• 低拷貝的靶序列（如單細胞PCR）

• 多重引物對反應

  
  

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