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【產(chǎn)品簡介】
【詳細說明】
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品包裝 | 產(chǎn)品價格 |
| P0908 | RIPA裂解液（強中弱套裝） | 共150ml | 280.00元 |
我們生產(chǎn)的RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。
RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種，根據(jù)其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。關于不同的RIPA裂解液以及我們生產(chǎn)的其它裂解液的主要特點和差異，以及如何選擇裂解液可參考附錄。
RIPA裂解液（強中弱套裝）含有RIPA裂解液（強）、RIPA裂解液（中）和RIPA裂解液（弱）各50ml，便于實驗時探索不同的實驗條件。
用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用我們生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度.
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| P0902 | RIPA裂解液（強） | 50ml |
| P0904 | RIPA裂解液（中） | 50ml |
| P0906 | RIPA裂解液（弱） | 50ml |
|
| PMSF（100mM） | 1.8ml |
| — | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，一年有效。
注意事項：
為取得*的使用效果，盡量避免過多的反復凍融?？梢赃m當分裝后使用。
裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
關于裂解液的選擇，一方面可以參考我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點、差異，選擇合適的裂解液；另一方面也需要通過一些預實驗來摸索*的適合您實驗條件的裂解液。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
對于培養(yǎng)細胞樣品：
1.融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。
2.對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍（如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗）。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。
3.充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升。
對于組織樣品：
1.把組織剪切成細小的碎片。
2.融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。
3.按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。）
4.用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5.充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6.如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NFκB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。
附：我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點、差異和選擇
首先請參考下表，了解各種裂解液的主要特點和差異。
| 產(chǎn)品編號 | P0907 |
P0902 | P0904 | P0906 | P0910 | P0912 |
| 產(chǎn)品名稱 | Western及IP細胞裂解液 | RIPA裂解液（強） | RIPA裂解液（中） | RIPA裂解液（弱） | NP-40裂解液 | SDS裂解液 |
| 有效裂解成分 | 1% Triton X-100 | 1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS | 1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS | 1% NP-40, 0.25% deoxycholate | 1% NP-40 | 1% SDS |
| 裂解強度 | 溫和 | 強 | 中 | 溫和 | 溫和 | 強 |
| 對膜蛋白的提取 | 一般 | 很好 | 較好 | 一般 | 一般 | 很好 |
| 對胞漿蛋白的提取 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 對核蛋白的提取 | 較好 | 很好 | 較好 | 較好 | 較好 | 很好 |
| 胞漿磷酸化蛋白提取 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 細胞核轉(zhuǎn)錄因子提取 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 含蛋白酶抑制劑 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 |
| 含磷酸酯酶抑制劑 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 |
| 主要用途 | WB, IP,co-IP | WB, IP | WB, IP | WB, IP, co-IP | WB, IP,co-IP | WB, ChIP |
用于普通的Western、IP或co-IP，我們推薦使用Western及IP細胞裂解液（P0907），該裂解液已被國內(nèi)各大研究機構廣泛使用，用戶普遍反映很好。裂解細胞或組織后，沒有非常粘滯的透明狀DNA團塊形成，不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續(xù)操作。另外該裂解液裂解的產(chǎn)物也適合用于磷酸化蛋白的Western檢測。
對于某些特殊蛋白的IP，如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細胞裂解液（P0907）效果不是非常理想，可以嘗試用RIPA裂解液（強、中或弱）或NP-40裂解液。如果發(fā)現(xiàn)IP的時候背景很高，即非特異的蛋白也被IP下來，則需要選用裂解強度較高的裂解液，例如RIPA裂解液（強或中）。如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法被IP下來，則說明裂解液的強度過強，可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液（弱）或NP-40裂解液。
對于某些難溶解蛋白的Western，如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細胞裂解液（P0907）效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA裂解液（強、中）或SDS裂解液。