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            上海北諾生物科技有限公司
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            周經(jīng)理 劉經(jīng)理
            
                    
            
                                                                                  
            
                            
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            流式檢測細(xì)胞樣品的制備
            2013-4-24　　閱讀(1695)
            

            
							
				
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            方案A：組織培養(yǎng)細(xì)胞的制備。
            方案B：淋巴組織細(xì)胞制備。
            方案C：非淋巴組織細(xì)胞制備。
            方案D：全血PBMC的分離。
            小貼士
            1、流式細(xì)胞儀檢測需要將細(xì)胞制備成單細(xì)胞懸液。
            2、避免細(xì)胞成團(tuán)，以免堵塞流式細(xì)胞儀。
            3、實(shí)體組織制備單細(xì)胞懸液需要物理方法分離或酶消化法進(jìn)行，具體組織的方法，依照經(jīng)驗(yàn)來進(jìn)行。

            方案A: 組織培養(yǎng)細(xì)胞的制備
            實(shí)驗(yàn)材料：
            Accutase™ 酶細(xì)胞分離培養(yǎng)基 （eBioscience Cat. No. 00-4555）
            eBioscience® 流式染色緩沖液 （eBioscience Cat. No. 00-4222）
            15ml或50ml的離心管。
            實(shí)驗(yàn)流程：
            1、如果是懸浮細(xì)胞，則小心將細(xì)胞移入離心管中，進(jìn)行計(jì)數(shù)和活力分析。進(jìn)行步驟3.
            2、如果是貼壁細(xì)胞，建議使用Accutase™ 酶細(xì)胞分離培養(yǎng)基 （eBioscience Cat. No. 00-4555）是細(xì)胞團(tuán)塊分離，制備成單細(xì)胞懸液后置于離心管中計(jì)數(shù)和活力分析。（注意:accutase 可能會(huì)改變某些細(xì)胞表位，應(yīng)該預(yù)實(shí)驗(yàn)觀察避免其干擾檢測）
            3、300g 離心5min。棄去上清，應(yīng)用適量的流式染色緩沖液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107/ml。

            方案B：淋巴組織細(xì)胞制備。
            實(shí)驗(yàn)材料：
            60×15mm 的組織培養(yǎng)皿
            5ml 注射器
            細(xì)胞過濾器（尼龍網(wǎng)過濾）
            eBioscience® 流式染色緩沖液 （eBioscience Cat. No. 00-4222） 
            15ml或50ml的離心管。
            實(shí)驗(yàn)方案：
            1、獲取組織（脾臟，淋巴結(jié)或胸腺）加入5~10ml eBioscience® 流式染色緩沖液 （eBioscience Cat. No. 00-4222），使用5ml注射器注射心研磨組織（或采用兩片載玻片研磨亦可）。 
            2、收集磨碎的細(xì)胞懸液，過濾至離心管中計(jì)數(shù)和活力分析。 
            3、300g 離心5min。棄去上清，應(yīng)用適量的流式染色緩沖液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107/ml。

            方案C：非淋巴組織細(xì)胞制備。
            剪刀和手術(shù)刀片
            剪刀和手術(shù)刀片 
            PBS 
            60×15mm 的組織培養(yǎng)皿 
            5ml 注射器 
            細(xì)胞過濾器（尼龍網(wǎng)過濾） 
            eBioscience® 流式染色緩沖液 （eBioscience Cat. No. 00-4222） 
            15ml或50ml的離心管。
            實(shí)驗(yàn)流程:
            1、獲取組織剪碎或切碎組織為2~4mm碎塊，用PBS稀釋適量的酶進(jìn)行消化（溫度，方法依照酶的說明書）。 
            2、小心分離細(xì)胞團(tuán)塊，過濾除去死細(xì)胞和碎片。 
            3、300g 離心5min，棄去上清。加PBS 5ml 300g 離心5min，棄去上清，重復(fù)一次。計(jì)數(shù)和活力分析。 
            4、300g 離心5min，棄去上清，應(yīng)用適量的流式染色緩沖液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107/ml。

            方案D：全血PBMC的分離。
            實(shí)驗(yàn)材料： 
            PBS 
            Ficoll® 淋巴細(xì)胞分離液 
            eBioscience® 流式染色緩沖液 （eBioscience Cat. No. 00-4222） 
            15ml或50ml的離心管。
            實(shí)驗(yàn)流程： 
            1、以PBS 1:1稀釋血樣。將血樣輕輕加到2ml Ficoll® 淋巴細(xì)胞分離液或其他品牌亦可。 
            2、1000g離心20min,小心吸取分離液和PBS之間的霧狀細(xì)胞，即為PBMC。至新的離心管中。 
            3、4度，300g 離心5min,棄上清。應(yīng)用適量的流式染色緩沖液重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)和細(xì)胞活力，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107/ml。
            
      
            
      
      
            
    
            
    
            
  
            

            
		 







  
    
    				
			

		
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    

    

     
     
     
	 



	
	
	


            
	
            
		
            
			
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