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兩天5篇《Nature》！Incucyte殺瘋了……
長時程活細胞成像系統(tǒng)Incucyte®因其簡便的實驗設(shè)置和分析流程、以及廣泛的應(yīng)用方向，深受用戶喜愛。在體外細胞水平的實驗中發(fā)揮著重要作用。引用其數(shù)據(jù)的CNS正刊上論文數(shù)量眾多，目前使用到Incucyte®發(fā)表的CNS正刊總數(shù)已經(jīng)達到約200篇，往期鏈接如下：
活細胞成像刷屏！一天兩篇CELL揭秘神經(jīng)退行性疾病和腫瘤免疫新療法
一天三篇CNS，Incucyte® 開啟細胞研究新速度
一周3篇Nature：Incucyte® 上演科研帽子戲法！
最近的2024年10月，利用Incucyte® 發(fā)CNS正刊的數(shù)量又達到了新高度，兩天5篇NATURE!
他們又是如何應(yīng)用Incucyte® 的呢？
免疫細胞和靶細胞共培養(yǎng)[1]
中毒性表皮壞死松解癥（TEN）是一種由常見藥物誘導(dǎo)的致命皮膚反應(yīng)，已成為一個新興的公共衛(wèi)生問題。TEN患者會因角質(zhì)形成細胞死亡，而出現(xiàn)嚴重和突然的表皮脫離。通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)TEN患者免疫細胞和角質(zhì)形成細胞區(qū)室中I型和II型干擾素的顯著富集。Incucyte® 體外實驗發(fā)現(xiàn)，使用JAK抑制劑托法替尼（ tofacitinib）降低了角質(zhì)形成細胞的細胞毒性。體內(nèi)口服給藥改善了兩種不同的TEN小鼠模型的臨床和組織學(xué)疾病嚴重程度。
圖1. Incucyte® 測試：自體共培養(yǎng)模型中，活化的外周血單核細胞（PBMC）在5小時內(nèi)有效殺死角質(zhì)形成細胞，并且這種作用被托法替尼以劑量依賴性方式抑制。每隔兩個小時測試一次，對死亡的角質(zhì)形成細胞進行統(tǒng)計。
Incucyte® 有多個板位，可以滿足多個實驗組的高通量測定。
細胞凋亡[2]
三陰性乳腺癌 （TNBC）因其高度侵襲性和高復(fù)發(fā)率而令人談虎色變，迫切需要開發(fā)更有效的治療方法。本文發(fā)現(xiàn)，AKT抑制劑與組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶EZH2抑制劑的藥物具有協(xié)同作用，并在體內(nèi)多個TNBC模型中促進持續(xù)的腫瘤消退，明確了其藥理作用。Incucyte® 被用于體外檢測藥物對腫瘤細胞系的殺傷作用。
圖2. Incucyte® 測試結(jié)果：NucLight Rapid Red試劑 （Sartorius，4717）標記細胞，用Cytotox Green （Sartorius，4633）監(jiān)測細胞毒性。每2小時采集一次圖像，持續(xù)5天。使用Incucyte®軟件通過量化overlay的NucLight-red和Cytotox-green雙陽性細胞數(shù)（即死亡的細胞數(shù)）除以 NucLight-red 陽性細胞的總數(shù)來確定細胞毒性細胞的百分比。
Incucyte®有完善的活細胞試劑，并提供相應(yīng)的protocol，以及overlay分析等軟件功能。
劃痕實驗[3]
人類產(chǎn)前皮膚由先天免疫細胞（包括巨噬細胞）組成，但這些細胞是否僅在免疫方面發(fā)揮作用，還是在形態(tài)發(fā)生中具有其他功能，尚不清楚。本文匯編了一份全面的產(chǎn)前人類皮膚多組學(xué)參考圖譜，結(jié)合單細胞和空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)，表征了皮膚的微解剖組織生態(tài)位。該圖譜揭示了非免疫細胞和免疫細胞之間的串擾是毛囊形成的基礎(chǔ)，與無疤痕傷口愈合有關(guān)，對皮膚血管生成至關(guān)重要。
圖3. Incucyte® 劃痕測試：成纖維細胞與巨噬細胞共培養(yǎng)可以增加傷口愈合。
Incucyte® 有專門的工具可以方便的創(chuàng)造一致的劃痕。
兩種細胞的競爭[4]
晚期尿路上皮癌（UC）是一種經(jīng)常致命的疾病，具有顯著的遺傳異質(zhì)性?；煏T導(dǎo)數(shù)百個晚期亞克隆突變的爆發(fā)。通過基因組計算工具觀察到，形成染色體外DNA （ecDNA）的SV（復(fù)雜結(jié)構(gòu)變異）具有頻繁的高拷貝數(shù)環(huán)狀擴增子特征，例如尿路上皮癌中的大多數(shù) CCND1（G1/S-特異性周期蛋白-D1基因），并包含額外的DNA片段并導(dǎo)致治療耐藥性的進化。在競爭試驗中，在順鉑或載體對照存在下，共培養(yǎng)等數(shù)量的具有GFP標記的空載體和mCherry標記的CCDN1游離型ecDNA的UMUC1細胞（CCDN1 UMUC1），使用Incucyte®活細胞成像系統(tǒng)測量 mCherry/GFP熒光信號的比率來監(jiān)測對化療的適應(yīng)性。
圖4. 用Incucyte®監(jiān)測4天的mCherry/GFP細胞比例示意圖（6個小時拍攝一次），以追蹤腫瘤細胞對化療的適應(yīng)性
圖5. CCND31 UMUC1細胞與對照細胞的比率，化療藥物順鉑的處理組明顯高于對照，說明CCND31 UMUC1細胞對化療有更佳的適應(yīng)性
Incucyte®有多個熒光通道可以對多種細胞進行追蹤。
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Incucyte®什么優(yōu)點呢？
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培養(yǎng)箱內(nèi)可長達數(shù)周的連續(xù)觀察，最短幾分鐘間隔拍攝，減少人力，防止過多操作對細胞的傷害和移動多個板位，分別獨立設(shè)置檢測程序，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高具有劃痕，腫瘤球，類器官，趨化，血管生成等多個分析拍攝模塊，并配套相應(yīng)的耗材高效簡便的模塊化軟件設(shè)置和數(shù)據(jù)分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標多參數(shù)；捕捉細胞每個細節(jié)，使得結(jié)果更加準確大于100種優(yōu)化過的活細胞專用熒光試劑、耗材及詳盡的Protocol實驗形式多樣化：定性，兩者結(jié)合，協(xié)同/競爭實驗，垂釣文章數(shù)大于16000篇，認可度高只要放好您的細胞，其他交給Incucyte®吧！祝愿大家都能用Incucyte®發(fā)好文章！
Incucyte®長時程活細成像系統(tǒng)應(yīng)用文集
-參考文獻-
[1]Spatial proteomics identifies JAKi as treatment for a lethal skin disease | Nature
[2]AKT and EZH2 inhibitors kill TNBCs by hijacking mechanisms of involution | Nature
[3[A prenatal skin atlas reveals immune regulation of human skin morphogenesis | Nature
[4]The interplay of mutagenesis and ecDNA shapes urothelial cancer evolution | Nature