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            上海信帆生物科技有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第13年

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            彗星實(shí)驗(yàn),單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測服務(wù)

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            具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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            • 所在地

              上海市

            更新時(shí)間:2025-02-14 10:34:31瀏覽次數(shù):1274次

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            彗星實(shí)驗(yàn)(Comet Assay),也稱為單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)(Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE),是一種用于檢測細(xì)胞DNA損傷的分子生物學(xué)技術(shù)。該實(shí)驗(yàn)因其在顯微鏡下觀察到的DNA遷移圖案形似彗星而得名。彗星實(shí)驗(yàn)廣泛應(yīng)用于毒理學(xué)、環(huán)境科學(xué)、放射生物學(xué)和癌癥研究等領(lǐng)域,用于評估化學(xué)物質(zhì)、輻射或其他因素對DNA的損傷。

            信帆生物提供:彗星實(shí)驗(yàn),單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測服務(wù)

            服務(wù)介紹:彗星實(shí)驗(yàn)(Comet Assay),也稱為單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)(Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE),是一種用于檢測細(xì)胞DNA損傷的分子生物學(xué)技術(shù)。該實(shí)驗(yàn)因其在顯微鏡下觀察到的DNA遷移圖案形似彗星而得名。彗星實(shí)驗(yàn)廣泛應(yīng)用于毒理學(xué)、環(huán)境科學(xué)、放射生物學(xué)和癌癥研究等領(lǐng)域,用于評估化學(xué)物質(zhì)、輻射或其他因素DNA的損傷。
            檢測原理:
            當(dāng)細(xì)胞受到外部因素(如輻射、重金屬暴露、化學(xué)物質(zhì)等)影響時(shí),細(xì)胞內(nèi)的DNA可能出現(xiàn)單鏈或雙鏈斷裂。在中性或堿性條件下,細(xì)胞經(jīng)過裂解、解旋和電泳等步驟后,損傷的DNA斷鏈及片段會(huì)離開核DNA向陽極移動(dòng),形成彗星狀的圖像。DNA受損越嚴(yán)重,產(chǎn)生的斷片越多且片段越小,電泳時(shí)遷移的DNA量也就越大,遷移距離越長。在熒光顯微鏡下,可以觀察到尾長增加、尾部熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。在一定條件下,DNA遷移距離(彗星尾長)和DNA含量(熒光強(qiáng)度)分布與DNA損傷程度呈線性相關(guān)。
            實(shí)驗(yàn)步驟:
            1
            、單細(xì)胞懸液制備:將細(xì)胞調(diào)整為適當(dāng)?shù)臐舛?,用于后續(xù)的制膠步驟。
            2
            、制膠:在載玻片上制備三層膠,第一層為正常熔點(diǎn)瓊脂糖,用于使第二層平整和附著緊密;第二層為含有細(xì)胞的低熔點(diǎn)瓊脂糖,用于固定細(xì)胞;第三層為低熔點(diǎn)瓊脂糖,對第二層細(xì)胞起保護(hù)作用。
            3
            、細(xì)胞裂解:將載玻片浸入細(xì)胞裂解液中,溶解細(xì)胞膜及核膜,除去蛋白質(zhì)、RNA等,僅存留核骨架。
            4
            、DNA堿解旋:將載玻片置于堿性電泳緩沖液中,使DNA在堿性條件下解螺旋形成單鏈DNA,并使DNA斷鏈在電泳場中易于遷移。
            5
            、單細(xì)胞電泳:在適當(dāng)?shù)碾妷汉碗娏鳁l件下進(jìn)行電泳,使損傷的DNA斷鏈及片段向陽極移動(dòng)。
            6
            、中和與染色:電泳完畢后,用中和液處理載玻片,然后用熒光染料(如溴化乙錠)對DNA進(jìn)行染色。
            7
            、鏡檢和圖像分析:在熒光顯微鏡下觀察并拍照電泳圖譜,利用圖像分析軟件對彗星圖像進(jìn)行指標(biāo)分析,如彗星全長、尾長、尾矩和Olive尾距等。
            注意事項(xiàng):
            1
            、細(xì)胞活性:確保細(xì)胞在處理過程中保持活性,避免人為損傷。
            2
            、實(shí)驗(yàn)條件:嚴(yán)格控制電泳時(shí)間、電壓和緩沖液pH,以確保結(jié)果的可重復(fù)性。
            3
            、數(shù)據(jù)分析:使用標(biāo)準(zhǔn)化軟件分析彗星圖像,避免主觀誤差。
            4
            、對照設(shè)置:設(shè)置陽性和陰性對照,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。


            彗星實(shí)驗(yàn),單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測服務(wù)
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