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Z小抑菌濃度測(cè)定試驗(yàn)（瓊脂稀釋法）
1 原 理
本試驗(yàn)采用瓊脂稀釋法將不同濃度的抑菌劑混合溶解在瓊脂培養(yǎng)基中，然后點(diǎn)種細(xì)菌，通過細(xì)菌的生長(zhǎng)與否，確定抗（抑）菌物質(zhì)抑制受試菌生長(zhǎng)的zui低濃度，即zui小抑菌濃度（Minimal Inhibitory Concentration，MIC）。本方法適用于非溶出性抗（抑）菌產(chǎn)品抗（抑）菌效果的鑒定。
2 實(shí)驗(yàn)材料及器材
（1）實(shí)驗(yàn)菌株 金黃色葡萄球菌 ATCC 6538 ，大腸桿菌 8099或ATCC 11229，可根據(jù)抑菌劑的用途，選擇特定的菌株
（2）營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，制備后經(jīng)高壓滅后，置 45℃～50℃水浴備用，此培養(yǎng)基將用于對(duì)照試驗(yàn)
（3）磷酸鹽緩沖液 0.03mol/L，pH7.2
（4）滅菌蒸餾水
（5）加樣器（1μL～10μL）
（6）45℃～50℃水浴恒恒溫培養(yǎng)箱
（7）吸管、試管、平皿
（8）37℃恒溫培養(yǎng)箱
3 操作步驟
（1）抗（抑）菌溶液的配制：以無菌操作取 5mL或 5g（固體研磨后）樣品，放入 45mL 滅菌蒸餾水中，充分振蕩溶解，配成 10% 的均勻分散的溶液或懸液。
（2）抗菌劑稀釋液配制：將已配成 10% 的抗（抑）菌溶液或懸液用蒸餾水做對(duì)倍系列稀釋成不同濃度的受試液，置 45℃～50℃ 水浴恒溫備用。
（3）雙倍濃度營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：制備后經(jīng)高壓滅菌后，置 45℃～50℃ 水浴備用，此培養(yǎng)基將用于稀釋抗（抑）菌溶液或懸液。
（4）含抗（抑）菌液培養(yǎng)基的配制：分別取 10mL 系列稀釋的抗菌液加入平皿內(nèi)。將在 45℃～50℃ 水浴中的雙倍濃度營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 10mL，加進(jìn)平皿內(nèi)，邊加邊搖晃平板，使抗（抑）菌液和培養(yǎng)基充分混勻。
（5）用加樣器取1μL～2μL（含菌量約為 107
cfu/mL 的PBS溶液）菌懸液點(diǎn)種于含抗（抑）菌液培養(yǎng)基的平皿，接種后所形成的菌液圈直徑約 5mm～8mm（每個(gè)點(diǎn)菌量約為 104cfu）。
（6）以同樣方法接種不含抗（抑）菌成分的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，作為陽性對(duì)照。
（7）將接種后的平板放置 35℃ 恒溫培養(yǎng)箱中，倒置培養(yǎng) 18h～24h，觀察結(jié)果。
4 評(píng)價(jià)規(guī)定
菌落生長(zhǎng)被*抑制的zui低抗（抑）菌液濃度為該樣品對(duì)受試菌的MIC。單一菌落生長(zhǎng)可忽略不計(jì)。
5 注意事項(xiàng)
（1）接種時(shí)，應(yīng)由低抗（抑）菌劑濃度向高濃度平板依次接種，zui后接種對(duì)照平板。
（2）為了保證平板受熱均勻，培養(yǎng)時(shí)平板堆放不得超過4個(gè)。