EPI400 Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格

EPI400:                                                          100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                      10μl

保存條件（保質(zhì)期）：                          -80℃（6個(gè)月）

基因型

F^- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ^- rpsL (Str^R) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

EPI400 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說(shuō)明

EPI400來(lái)源于EC100菌株，將EC100核基因中控制質(zhì)粒拷貝數(shù)的pcnB基因刪除后引入一個(gè)誘導(dǎo)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的pcnB基因,即是EPI100菌株。EPI400菌株可以降低質(zhì)粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種不穩(wěn)定DNA或毒性基因的克隆，在加入WDEPI-誘導(dǎo)劑 I 后又可以提高質(zhì)粒產(chǎn)量到正常狀態(tài)。[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使EPI400菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA 。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。lacZΔM15 標(biāo)記的存在使EPI400可用于藍(lán)白斑篩選，tonA賦予其抗噬菌體T1和T5的能力，rpsL賦予其鏈霉素抗性。EPI400感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法

1. EPI400感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15 h。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化。插入冰中10分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。