DH5α Chemically Competent Cell

產品規(guī)格

DH5α：                                                      100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

DH5α Chemically Competent Cell產品說明

DH5α菌株是實驗室常用的感受態(tài)細胞。 缺失核酸內切酶 (endA)，提高了質粒DNA的產量和質量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選。DH5α感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>5×10⁸ cfu/μg DNA。 

操作方法

1. DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。 
2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。 
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少終用于涂板的菌量。