GT115 Chemically Competent Cell 

產(chǎn)品規(guī)格

GT115：                                                      100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月） 

基因型

F^- mcrA?(mrr-hsdRMS-mcrBC) f80lacZDM15?lacX74 recA1 rpsL (Str^R) endA1 ?dcm uidA(DMluI)::pir-116?sbcC-sbcD

GT115 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

GT115菌株，是專門用來克隆含有發(fā)夾結構（Hairpin）或重復序列等DNA二級結構的基因序列的大腸桿菌菌株。大腸桿菌中存在一種SbcCD蛋白復合體，可以識別DNA發(fā)夾結構，并將其切除；將sbcC和sbcD兩個基因突變，增強了發(fā)夾結構DNA的穩(wěn)定性。同時在大腸桿菌基因組中引入uidA(DMluI)::pir-116，使GT115可以表達 兀 蛋白，含有R6Kg ori復制子的質粒( pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA …)可以正常復制。該菌株還含有具有核酸酶 (endA)突變、重組酶 (recA)突變，增強了外源DNA的穩(wěn)定性。GT115感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19檢測轉化效率>2×10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. GT115感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養(yǎng)基(S.O.C.營養(yǎng)豐富，可提高轉化效率)。

4. 37℃，225 rpm復蘇60分鐘。

5. 5000 rpm離心1分鐘收菌，留取100 μl左右上清吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C. 或LB培養(yǎng)基上。

6. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率?；烊肽康腄NA時應輕柔操作。轉化高濃度的質粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。

2. 此菌株具有鏈霉素抗性，擁有這種抗性的質粒無法使用。