Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell

產(chǎn)品規(guī)格 

Rosetta 2(DE3)：                                               100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                           10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                                   -80℃（6個(gè)月） 

基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^-) gal dcm (DE3) pRARE2 (Cam^R)

Rosetta 2(DE3) Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

Rosetta 2(DE3)菌株來源于BL21，是BL21的衍生菌株，為L(zhǎng)on蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株，這兩種酶的缺失有效防止異源蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的降解。將具有氯霉素抗性的pRARE2質(zhì)粒導(dǎo)入BL21 (DE3)細(xì)胞中即是Rosetta 2(DE3)，pRARE2質(zhì)?？裳a(bǔ)充大腸桿菌缺乏的7種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)對(duì)應(yīng)的tRNA，提高外源基因的表達(dá)水平。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)，可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。Rosetta 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1. Rosetta 2(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的LB無菌培養(yǎng)液，37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。