2023年10月12日，國(guó)家藥監(jiān)局、國(guó)家衛(wèi)生健康委發(fā)布實(shí)施《中華人民共和國(guó)藥典》（2020年版）第一增補(bǔ)本的公告?！豆妗分赋觯吨腥A人民共和國(guó)藥典》（2020年版）第一增補(bǔ)本，自2024年3月12日起施行。其中，在三部新增通則和指導(dǎo)原則中發(fā)布了“9403 人用疫苗雜質(zhì)控制技術(shù)指導(dǎo)原則”，“人用疫苗雜質(zhì)控制技術(shù)指導(dǎo)原則”公示稿曾于2021年9月在藥典委發(fā)布。

該指導(dǎo)原則是對(duì)人用疫苗產(chǎn)品雜質(zhì)控制的基本考慮，旨在指導(dǎo)疫苗生產(chǎn)和研發(fā)過(guò)程中對(duì)雜質(zhì)成分的分析、評(píng)估并制定相應(yīng)的控制策略，以盡可能減少或消除雜質(zhì)對(duì)疫苗安全性和有效性的影響，保證疫苗產(chǎn)品質(zhì)量。該指導(dǎo)原則應(yīng)基于具體疫苗品種的特點(diǎn)及相關(guān)知識(shí)參考使用。指導(dǎo)原則主要分為三部分內(nèi)容，分別為：

1）疫苗雜質(zhì)來(lái)源。闡述了工藝相關(guān)雜質(zhì)和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)兩大疫苗雜質(zhì)來(lái)源，并提到要重點(diǎn)關(guān)注宿主細(xì)胞蛋白和核酸、所用生物/化學(xué)材料的殘留物以及包材相容性研究。

2）疫苗雜質(zhì)控制的原則及策略。疫苗雜質(zhì)控制應(yīng)基于“質(zhì)量源于設(shè)計(jì)”的原則，對(duì)疫苗中雜質(zhì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、全過(guò)程控制和全生命周期管理，并列舉了不同類型疫苗雜質(zhì)的控制要點(diǎn)（如下圖所示）。同時(shí)在文中提到有機(jī)溶劑的使用應(yīng)符合“殘留溶劑測(cè)定法”（通則0861）以及參照“分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”（指導(dǎo)原則9101）對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證，并重點(diǎn)關(guān)注方法的專屬性和靈敏度。

3）變更事項(xiàng)對(duì)疫苗雜質(zhì)控制的影響。應(yīng)定期評(píng)估上市疫苗的生產(chǎn)工藝性能和雜質(zhì)控制策略的有效性，持續(xù)優(yōu)化產(chǎn)品雜質(zhì)控制策略，如發(fā)生變更應(yīng)參照相關(guān)要求開(kāi)展變更前后的可比性研究等。

指導(dǎo)原則9403 全文可概括如下方表格所示：

疫苗接種每年可拯救數(shù)百萬(wàn)人的生命，其通過(guò)與身體的天然防御系統(tǒng)協(xié)同作用來(lái)建立保護(hù)網(wǎng)，從而降低感染疾病的風(fēng)險(xiǎn)。據(jù)統(tǒng)計(jì)迄今擁有的疫苗可以預(yù)防20多種危及生命的疾病，幫助所有年齡段的人活得更長(zhǎng)、更健康。目前，疫苗接種每年可防止350萬(wàn)至500萬(wàn)人死于白喉、破傷風(fēng)、百日咳、流感和麻疹等疾病。疫苗接種是初級(jí)衛(wèi)生保健的一個(gè)關(guān)鍵組成部分，也是一項(xiàng)無(wú)可爭(zhēng)議的人權(quán)。它也是錢(qián)能買(mǎi)到的最好的健康投資之一。疫苗對(duì)預(yù)防和控制傳染病暴發(fā)至關(guān)重要，疫苗支撐著全球衛(wèi)生安全，并將成為抗擊抗微生物藥物耐藥性斗爭(zhēng)的重要工具。（摘自WHO）

然而直到今天，全球疫苗安全事件仍層出不窮。不規(guī)范的管理、不合法的添加、不合規(guī)的質(zhì)量控制都是疫苗安全事件頻發(fā)的原因，進(jìn)而導(dǎo)致疫苗這一本用于預(yù)防/治療疾病的工具卻成為了加速疾病和死亡的利器。在疫苗的質(zhì)量控制中，雜質(zhì)的分析和控制至關(guān)重要，疫苗中雜質(zhì)種類繁雜，來(lái)源多樣，同時(shí)在指導(dǎo)原則9403中強(qiáng)調(diào)了要重點(diǎn)關(guān)注分析方法的專屬性和靈敏度，這使得雜質(zhì)分析難度進(jìn)一步提升。島津于2017年起先后與權(quán)威機(jī)構(gòu)和知名疫苗企業(yè)開(kāi)展合作，有著非常豐富的經(jīng)驗(yàn)和專業(yè)的團(tuán)隊(duì)，在本篇中小編將和您分享島津的疫苗雜質(zhì)分析方案，助力廣大用戶應(yīng)對(duì)新規(guī)發(fā)布及實(shí)施。

01液相色譜法檢測(cè)疫苗中四種常見(jiàn)防腐劑殘留

● 分析條件

分析儀器：島津超高效液相色譜儀LC-40

色譜柱：Shimadzu Shim-pack GIST 100 mm x 2.1 mm I.D., 2.0 μm; P/N: 227-3001-04; 島津（上海）實(shí)驗(yàn)器材有限公司

流動(dòng)相：A-水，B-乙腈

流速：0.4 mL/min

柱溫：40 ℃

進(jìn)樣體積：5 μL

洗脫方式：梯度洗脫，B相初始濃度為10%。時(shí)間程序見(jiàn)表1。

表1：梯度洗脫時(shí)間程序

● 專屬性及加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

圖1：對(duì)照品（0.5 ppm）和空白溶劑270 nm和220 nm色譜圖

表2：樣品加標(biāo)回收率（n=3）

注：N.D.表示未檢出

結(jié)果顯示，方法專屬性良好，符合9403要求，且加標(biāo)回收率在96.8~101.30%之間，RSD在0.05~0.28%之間，方法可靠，可為疫苗中防腐劑殘留分析提供參考。

02 LCMSMS檢測(cè)疫苗中卡那霉素殘留

生物制品中卡那霉素的檢測(cè)常用免疫法，但前處理復(fù)雜、靈敏度和專一性受限；LCMSMS方法前處理簡(jiǎn)單、專一性強(qiáng)、靈敏度高、分析速度快，因此本應(yīng)用采用LCMSMS方法檢測(cè)卡那霉素。

● 分析條件

分析儀器：島津超高效液相色譜儀LC-40與三重四極桿質(zhì)譜儀LCMS-8045聯(lián)用系統(tǒng)

色譜柱：Shimadzu Shim-pack GIST Amide 150 mm x 2.1 mm I.D., 3.0 μm; P/N: 227-30818-06; 島津（上海）實(shí)驗(yàn)器材有限公司

流動(dòng)相：A-250 mM甲酸銨+0.1% 甲酸水溶液，B-乙腈

流速：0.8 mL/min

柱溫：50 ℃

進(jìn)樣體積：10 μL

洗脫方式：梯度洗脫，B相初始濃度為75%。時(shí)間程序見(jiàn)表3。

表3：梯度洗脫時(shí)間程序

● 專屬性及加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

圖2：對(duì)照品（0.5 ppm）和空白溶劑270 nm和220 nm色譜圖

表4：樣品加標(biāo)回收率（n=3）

注：N.D.表示未檢出

結(jié)果顯示，方法專屬性良好，符合9403要求，且加標(biāo)回收率在90.10~101.50%之間，RSD在0.65~2.38%之間，方法可靠，可為疫苗中抗生素殘留分析提供參考。

島津始終關(guān)注大家的用藥安全，并積極應(yīng)對(duì)法規(guī)要求和變化，更多第一增補(bǔ)本增修訂應(yīng)用方案將持續(xù)推出，敬請(qǐng)期待！

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