細胞培養(yǎng)中常見的污染情況總結

對黑膠蟲的各種猜測及相應的處理
1. 非生物類
（1）細胞碎片類
在細胞培養(yǎng)的時候， 由于細胞代謝、物質交換、周邊環(huán)境變化，尤其是在從37度培養(yǎng)箱中拿出來觀察的過程中，由于液體培養(yǎng)基的比熱較大，液內溫度高于外界溫度，造成冷熱交換、小范圍內形成液體流動加劇，當然這些小歲末就會被攪動起來形成似乎"游動"的感覺；隨著細胞培養(yǎng)的繼續(xù)，部分細胞開始衰亡，細胞膜結構破裂，破裂之后的細胞內容物泄露到培養(yǎng)液中。尤其是溶酶體的破壞，連續(xù)性地造成其他細胞和細胞器的損傷，如果換液不很勤，又會出現(xiàn)進一步破壞和殘渣的出現(xiàn)；再者，"黑焦蟲"問題是很多細胞培養(yǎng)者已經發(fā)現(xiàn)的問題，但到目前為止尚未找到其監(jiān)測和排除的試劑和手段，這首先是由于所謂"黑焦蟲"病原體根本難以收集和捕捉， 這也從另一個側面證明了"黑焦蟲"問題的難以確定性；再說任何一種外來的微生物在培養(yǎng)基中都會有生命活動的反應和表現(xiàn)，而不是簡單地運動那樣的外觀性表現(xiàn)。舉一個例子：如果"黑焦蟲"的運動狀況已經到了用顯微鏡已經可以觀察出的程度，其營養(yǎng)代謝和能量需求也就可想而知。這樣，培養(yǎng)液中的影響消耗、酸堿含量程度等都要發(fā)生明顯變化。比如說：迅速的、大含量的沉淀， pH值的迅速下降，細胞大量破碎死亡、引發(fā)其它類型微生物侵染等等。而這些狀況，在所謂的"黑焦蟲"感染中，是很難觀察到的。同時"黑焦蟲"的出現(xiàn)而影響細胞狀態(tài)似乎得不到有力的證據。倒是細胞狀態(tài)下降的時候，"黑焦蟲"明顯增多了。很有可能是細胞狀態(tài)下降時，細胞衰亡產生的細胞碎片。所以黑膠蟲屬于細胞碎片是比較可能和合理的。
（2）玻璃培養(yǎng)瓶中的類似氧化硅的東西
網上有一篇文章說，黑膠蟲其實不是一種生物，是無機物，其本質是玻璃培養(yǎng)瓶里的硅顆粒?？捎绊懠毎L，細胞狀態(tài)好時，不明顯。細胞狀態(tài)較差，數(shù)量少時才容易看到，的辦法是用一次性培養(yǎng)瓶，可消除黑膠蟲影響。
（3）血清聚合物產物
gibco公司的血清說明，此物為血清聚合產物，而不是微生物。
2. 生物類
（1）支原體
有人曾認為黑膠可能是支原體污染，因為相對比較的文章指出，黑膠蟲可以通過濾膜，可以在空氣中傳播。而恰巧口腔支原體為人體口腔中之正常菌叢，所以實驗室之操作人員的污染亦可能為支原體的污染源。但有人為此做了實驗證明黑膠蟲不會是支原體，原因如下：
光鏡下可見, 因為體積不對，支原體在普通顯微鏡下不能看到。
多種染色后可見，甚至hoechst即能將它染色,一般來說支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭染色為陰性。所以，黑膠蟲是一種支原體的可能性比較小。
（2）真菌
有很多人發(fā)現(xiàn)類似黑膠蟲的，但zui后確定是真菌，二性霉素B對其有效。那說明黑膠蟲不存在只是細胞培養(yǎng)中的真菌感染，還是說明黑膠蟲污染屬于真菌類污染物。如果黑膠蟲是一種真菌，那么由此引起的污染是不會引起那么多人的關注，即使它很特殊。但是這不能排除那些認為"黑膠蟲"是真菌的細胞者，看到的只是一般真菌感染。由于細胞被感染了，要進行拯救處理，不像理論上那么簡單，稍有不注意都是很容易導致培養(yǎng)失敗，所以黑膠蟲是一種真菌也是不太可能。
（3）寄生類原蟲
黑膠蟲屬于寄生類的原蟲，而不是細菌、支原體，也不是什么補體、細胞碎片或蛋白沉淀。有人在400倍以上的高倍鏡下可以清楚的看到膠蟲有兩種不同形態(tài)，一種較大，運動較慢，泛紅光；另一種較小，運動較快，紅中帶綠，個小的圍著個大的分布，很可能是公的圍著雌的。這種生物也并非離開細胞就不能存活，也有人做過這樣的試驗，單純培養(yǎng)過污染膠蟲的血清4周，直到滿視野都是黑煤渣般的膠蟲。給人的感覺是膠蟲和細胞一樣有叢集性，如果膠蟲密度低則生長緩慢，如果手懶，拖了幾天沒換液，待膠蟲生長到一定濃度后便會飛速分生，細胞受感染的程度也大，這時除了培養(yǎng)基中可見外，細胞表面通常也象長滿了粉刺，所以有人認為細胞旁分泌的某些因子可以抑制膠蟲的生長。據說，中國病毒所和軍科院鑒定是一種寄生于牛血清內的一種原蟲，似乎和草履蟲和變形蟲有類似之處，然而由于課題經費不夠而不能繼續(xù)進行下去。由此黑膠蟲屬于原蟲的有比較大的可能性。