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主營(yíng)產(chǎn)品： 超微量分光光度計(jì),核酸蛋白檢測(cè)儀,超微量紫外分光光度計(jì),nano光度計(jì),超微量核酸蛋白檢測(cè)儀 |
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2021-4-22 閱讀(4379)
那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于分子篩（凝膠過濾層析）蛋白純化系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)：
分子篩定義：
分子篩層析，又稱為凝膠過濾層析或體積排阻層析。分子篩層析是利用有一定孔徑范圍的多孔凝膠作為固定相，對(duì)混合物中各組分按分子大小進(jìn)行分離的層析技術(shù)。具有分子篩作用的物質(zhì)很多，如浮石、瓊脂、瓊脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等。
避開原因一：工藝放大困難
分子篩層析無法遵循線性放大原則，即使遵循柱床高度不變的原則，工藝流速如何進(jìn)行調(diào)整，也是需要面臨的問題。為保證良好的分離效果，分子篩層析需要求相對(duì)較高的裝填高度，然而裝填高度偏高，反壓也勢(shì)必會(huì)偏高。由于層析填料的耐壓有限，在保證不超壓的前提下，工藝流速會(huì)明顯受限，這會(huì)使得整個(gè)純化過程時(shí)間漫長(zhǎng)。
避開原因二：層析柱裝填困難
在進(jìn)行層析柱裝填時(shí)，勻漿液濃度需要在一定的范圍內(nèi)（50%-70%），方可保證沉降均勻、柱效良好，這對(duì)層析柱的規(guī)格選型有著特殊要求。高度100 cm的層析柱，在勻漿濃度50%-70%時(shí)，假設(shè)壓縮系數(shù)為1.15，則實(shí)際使用高度為43.5-60.9 cm，這往往無法達(dá)到某些使用者的要求。若選配裝柱器，并考慮柱頭所占空間，這要求實(shí)驗(yàn)空間需高度充足。若考慮將2根層析柱串聯(lián)使用，則要求2根層析柱的柱效相當(dāng)，才可保證分離效果良好，這對(duì)裝填技術(shù)也有著較高要求。
避開原因三：測(cè)定柱效困難
常規(guī)柱效測(cè)定方法，要求平衡1.5-2 CV，進(jìn)樣后，洗脫至出峰（參考值：2 CV），流速30 cm/h。若假設(shè)裝填高度為60 cm，平衡、洗脫體積總計(jì)3.5 CV，經(jīng)計(jì)算，測(cè)定一次柱效，需耗時(shí)7小時(shí)?？梢韵胂?，當(dāng)發(fā)現(xiàn)柱效不理想，需要重新裝填并測(cè)定柱效時(shí)，過程是很繁瑣、耗時(shí)的。
避開原因四：維護(hù)保養(yǎng)操作困難
當(dāng)層析柱使用完畢，用20%乙醇保存時(shí)，同樣也很耗時(shí)。而且當(dāng)再次使用時(shí)，用水將20%乙醇置換走，一般需要3 CV以上，而且由于該過程反壓較大，通常還需要降低流速進(jìn)行。
總之，采用分子篩層析，各個(gè)環(huán)節(jié)都很繁瑣、耗時(shí)，因此，在進(jìn)行層析工藝設(shè)計(jì)時(shí)，要盡量避開分子篩層析。
以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于分子篩（凝膠過濾層析）蛋白純化系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)。
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