目錄:和元李記（上海）生物技術(shù)有限公司>>蛋白與免疫>>蛋白制備>> AP01L054NP40裂解液（帶抑制劑）
| CAS | / | 純度 | / |
|---|---|---|---|
| 分子量 | / | 分子式 | / |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100ml |
| 貨號 | AP01L054 | 應用領域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
NP40裂解液（帶抑制劑）是一種比較溫和的細胞組織裂解液，主要成分為50 mM Tris(pH7.4)，150 mM NaCl，1% NP-40以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制。對胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用，有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取。適用于常規(guī)的Western、IP和co-IP等實驗蛋白樣品的制備。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
NP40裂解液（帶抑制劑） | AP01L054 | 100 mL | 228 |
產(chǎn)品組分
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品組成 | 包裝規(guī)格 |
| AP01L054 | NP40裂解液 | 100 mL |
| 磷酸酶抑制劑 | 2*1 mL | |
| PMSF | 1 mL | |
| 產(chǎn)品說明書 | 一份 |
保存方法
裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保質(zhì)期一年。
使用方法
對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1~2秒后，細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞：離心收集細胞，按照6孔板每孔細胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混勻，充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50~100萬細胞/管，然后再裂解。具體NP-40裂解液的使用量參照表1。
2. 對于組織樣品
(1) 把組織*切成細小的碎片；
(2) 融解NP-40裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。
(3) 按照每20 mg組織加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事項
然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
| 樣品種類 | 樣品來源 | 收獲細胞數(shù) | RIPA用量 | 可制備樣品數(shù) |
| 細胞 | 6孔板 | 2.5*106 | 150-250 μL | 400-600 |
| 60 mm培養(yǎng)板 | 5.2*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
| 90 mm培養(yǎng)板 | 12.2*106 | 500-1000 μL | 100-200 | |
| 25 cm2培養(yǎng)瓶 | 5*106 | 300-500 μL | 200-300 | |
| 75 cm2培養(yǎng)瓶 | 2*107 | 1000-2000 μL | 50-100 | |
| 組織 | 20 mg組織塊 | 150-250 μL | 400-600 |
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