目錄:和元李記（上海）生物技術有限公司>>蛋白與免疫>>蛋白制備>> AP01L034RIPA裂解液（弱）
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100ml |
|---|---|---|---|
| 貨號 | AP01L034 | 應用領域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液，是一種經(jīng)典的動物組織/細胞快速裂解液，通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對組織細胞的消化作用使組織細胞崩解釋放出蛋白質，對細胞膜、胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用。李記生物 RIPA 裂解液(弱) 不含 PMSF 組分；適用于 PAGE、Western Blotting 和免疫沉淀(IP)的研究。
訂購信息
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| RIPA 裂解液（弱） | AP01L034 | 100mL |
運輸與保存
常溫運輸。4℃保存，有效期 12 個月。
配方表
25mM Tris•HCl, 150mM NaCl, 1% NP-40, 0.25% sodium deoxycholate，pH 7.6
使用方法
貼壁細胞
1. 取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×，不含 EDTA) （貨號:AP02L084） 或 PMSF(終濃度為
1 mM，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）。
2. 去除細胞培養(yǎng)液，用預冷的 PBS 洗滌兩次。按照 6 孔板每孔加入 150-200ul 的裂解液的比例均勻加
入裂解液，如果細胞密度過高可增加裂解液的量至 250-300 uL?！咀ⅰ浚毫呀庖哼^少會使細胞裂解不
充分，影響蛋白提取的質量。
3. 用槍吹打數(shù)下，冰上放置 10 min，期間每隔 2 min 用槍吹打數(shù)下。
4. 轉移細胞裂解液于 1.5 mL EP 管中。
5. 12,000 g，4℃ 離心 5min。
6. 收集上清。
懸浮細胞
1. 取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×，不含 EDTA) （貨號:AP02L084） 或 PMSF(終濃度為
1 mM，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）。
2. 收集細胞 0.5~2×107于 1.5mL 離心管中，1mL 預冷的 PBS 洗滌兩次，1,000xg 離心 3 min，棄上清，
重復三次。
3. 按照 6 孔板每孔加入 150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液，如果細胞密度過高可增加裂解液的
量至 250-300uL?！咀ⅰ浚毫呀庖哼^少會使細胞裂解不充分，影響蛋白提取的質量。
4. 用槍吹打數(shù)下并劇烈震蕩，冰上放置 10 min，期間每隔 2 min 震蕩一次。
5. 12,000 g，4℃ 離心 5 min。
6. 收集上清。
組織樣品
1. 把組織jian成細小的碎片。
2. 取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×，不含 EDTA) （貨號:AP02L084） 或 PMSF(終濃度為
1 mM，但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性）。
3. 按照每 100mg 組織加入 1mL 裂解液的比例加入裂解液（如裂解不充分可適當增加裂解液，如果需要
增加蛋白濃度可適當減少使用的裂解液體積）。
4. 用勻漿器勻漿，直至充分裂解（為防止蛋白降解請于冰上操作）。
5. 12,000 g，4℃ 離心 5 min。
6. 收集上清。
注意事項
1. 本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。
2. 如需檢測磷酸化蛋白，則需要額外添加磷酸酶抑制劑 II cocktail（50×）(貨號:AP03L025) 。
3. RIPA 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA
等的復合物。在不檢測基因組 DNA 結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗；
如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心
取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，例如 NF-kappaB、p53 等時，通常不必進行超
聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。
4. RIPA 裂解液（弱）含有較高濃度的去垢劑，不能用 Bradford 法測定蛋白。
5. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。
然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使
用勻漿器那樣裂解得比較充分。
6. 通常 6 孔板每孔細胞加入 150 μL 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量
到 200 μL 或 250 μL。
表 1: RIPA 裂解液的使用量
| 樣品來源 | 培養(yǎng)容器 | 收獲細胞數(shù) | RIPA 用量 | 可制備樣品數(shù) |
| 細胞 | 6 孔板 | 2.5 x 10^6 | 150-250 μL | 400~600 |
| 60 mm 培養(yǎng)板 | 5.2 x 10^6 | 300-500 μL | 200~300 | |
| 90 mm 培養(yǎng)板 | 12.2 x 10^6 | 500-1000 μL | 100~200 | |
| 25 cm2培養(yǎng)瓶 | 5 x 10^6 | 300-500 μL | 200~300 | |
| 75 cm2培養(yǎng)瓶 | 2 x 10^7 | 1000-2000 μL | 50~100 | |
| 組織 | 20 mg 組織塊 | 2.5 x 10^6 | 150-250 μL | 400~600 |
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