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            ATCC細胞培養(yǎng)基操作技術分析

            時間:2017/2/7閱讀:834
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            ATCC細胞培養(yǎng)基操作技術分析
            1.準備一個培養(yǎng)瓶,加入適宜細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基,液體體積按照說明書的推薦配置,并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH(CO2)。

            2.在37℃水浴中或ATCC細胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動。解凍要快,約2分鐘或直到冰晶融化即可。
            3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進一步的操作均需在無菌操作臺中嚴格無菌條件下進行。
            4.擰開凍存管的管帽并將內容物轉移到一個含有9 ml推薦培養(yǎng)基的無菌離心管中。通過溫和離心(125×g 10 min)除去冷凍保護劑(DMSO)。棄去上清,并用1或2 ml*培養(yǎng)基重懸細胞。將這些ATCC細胞懸液轉移到含有*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中并輕輕搖動以*混勻。
            5.培養(yǎng)24小時后檢查細胞狀態(tài)并在需要時進行傳代。
            某些細胞系,如雜交瘤細胞,需要幾天的時間才能從凍存狀態(tài)*復蘇。某些雜交瘤細胞在培養(yǎng)的*天活力較差,并會產生細胞碎片。在此之后,細胞就會開始復蘇,并進入指數增長。

            某些ATCC細胞,是在培養(yǎng)瓶中以活細胞的形式運輸的。這些培養(yǎng)瓶中會接種細胞,孵育并保證細胞能生長,然后補充滿培養(yǎng)基后再運輸。
            在收到培養(yǎng)瓶后,目視檢查培養(yǎng)基是否污染。包括異常的pH變化(苯酚紅變?yōu)辄S色或紫色),渾濁度,或有無顆粒。在低倍率(100×)的倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)基中是否有微生物污染以及ATCC細胞的形態(tài)。

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