狠狠色丁香久久综合婷婷亚洲成人福利在线-欧美日韩在线观看免费-国产99久久久久久免费看-国产欧美在线一区二区三区-欧美精品一区二区三区免费观看-国内精品99亚洲免费高清

            上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
            中級會員 | 第10年

            15026555973

            ATCC細(xì)胞
            蛋白質(zhì)產(chǎn)品
            核酸擴(kuò)增產(chǎn)品
            elisa試劑盒
            生化試劑
            PCR試劑盒
            標(biāo)準(zhǔn)品
            PCR鑒定
            生化試劑盒
            科研細(xì)胞
            分子生物學(xué)試劑
            ELISA實(shí)驗(yàn)檢測
            蛋白
            抗體

            貼壁細(xì)胞的傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作方法

            時間:2017/2/14閱讀:5259
            分享:

            貼壁細(xì)胞的傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作方法

            實(shí)驗(yàn)原理

            細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本飽和,為使干細(xì)胞能繼續(xù)生長,同時也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大,就必須進(jìn)行傳代(再培養(yǎng))。傳代培養(yǎng)是一種將細(xì)胞種保存下去的方法,同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

            實(shí)驗(yàn)材料

            CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、超凈工作臺、培養(yǎng)瓶、試管、移液管、巴斯德吸管、廢液缸、75%秀精棉球、酒精燈、貼壁細(xì)胞株、*培養(yǎng)基(RPMLI640或DMEM)、0.25%胰蛋白酶、PBS液。

            操作步驟

            (1)傳代前準(zhǔn)備

            A.預(yù)熱培養(yǎng)用液:把已經(jīng)配制好的培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。

            B.消毒:用75%酒精棉球擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。

            C.正確擺放使用的器械:保證足夠的操作空間,不僅便于操作而且可減少污染。

            D.點(diǎn)燃酒精燈:注意火焰不能太小。

            E.超凈工作臺內(nèi)拆除已消毒空培養(yǎng)瓶的外包裝。

            F.取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液:取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液,用酒精棉球擦拭好后放入超凈工作臺內(nèi)。

            G.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞:注意取出干細(xì)胞時要旋緊瓶蓋,用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面,再在顯微鏡下觀察細(xì)胞。

            H.打開瓶口:將各瓶口一一打開,同時要在酒精燈上燒口消毒。

            (2)胰蛋白酶消化

            A.入消化液:小心吸出舊培養(yǎng)液,用PBs清洗(沖洗),加入適量消化液(胰蛋白酶液),注意消化液的量以蓋住細(xì)胞,*消化溫度是37℃。

            B.顯微鏡下觀察細(xì)胞:倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞,若胞質(zhì)回縮,細(xì)胞之間不再連接成片,表明此時細(xì)胞消化適度。

            C.終止消化:加入與消化液等體積的新鮮培養(yǎng)液。

            (3)吹打分散細(xì)胞

            A.打制懸:用滴管將已經(jīng)消化細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液。

            B.吸細(xì)胞懸液人離心管:將細(xì)胞懸液吸人10 mL離心管中。

            C.平衡離心:平衡后將離心管放入臺式離心機(jī)中,以1000r/min離心5 min。

            D.棄上清液,加入新培養(yǎng)液:棄去上清液,加入2mL培養(yǎng)液,用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。

            (4)分裝稀釋細(xì)胞

            A.裝:將細(xì)胞懸液吸出分裝至2—3個培養(yǎng)瓶中,加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。

            B.顯微鏡下觀察細(xì)胞:倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量,必要時計數(shù)。注意密度過小會影響傳代細(xì)胞的生長,傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于5×105個/mL。做好標(biāo)記。

            (5)繼續(xù)培養(yǎng)

            用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶,適當(dāng)旋松瓶蓋,放人CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細(xì)胞2h后開始貼附在瓶壁上。

            注意事項(xiàng)

            A.嚴(yán)格的無菌操作。

            B.適度消化:消化的時間受消化液的種類、配制時間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響,消化過程中應(yīng)該注意培養(yǎng)干細(xì)胞形態(tài)的變化,一旦胞質(zhì)回縮,連接變松散,或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。

            會員登錄

            ×

            請輸入賬號

            請輸入密碼

            =

            請輸驗(yàn)證碼

            收藏該商鋪

            X
            該信息已收藏!
            標(biāo)簽:
            保存成功

            (空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

            常用:

            提示

            X
            您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
            撥打電話
            在線留言