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            細胞培養(yǎng)的各種器皿的物理消毒滅菌法

            時間:2017/2/23閱讀:5744
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            轉(zhuǎn)化細胞通過高潮、射線、微波以及器械進行滅菌或除菌的方法均為物理滅菌方法。

            (1)紫外線消毒 用于消毒空氣、操作臺面和一些不能用干熱、濕熱滅菌的培養(yǎng)器皿,如塑料培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板等。這是常使用的消毒方法之一。

            (2)干熱滅菌 主要用于玻璃器皿的滅菌。將用于細胞培養(yǎng)的器皿放人干燥箱內(nèi),加熱至160℃,保溫90-120 min。用于RNA提取實驗的用品則需180℃,保溫5-8 h。

            (3)濕熱滅菌 此方法也稱為高壓蒸汽滅菌,是zui有效的一種滅菌方法。主要應(yīng)用范圍是布類、橡膠制品(如膠塞)、金屬器械、玻璃器皿、某些塑料制品以及加熱后不發(fā)生沉淀的無機溶液(如Hanks液、PBS、20×SSC等)。手動高壓滅菌鍋操作如下:

            ①首先查看高壓鍋內(nèi)的水是否充足,放人物品蓋好蓋。

            ②加熱高壓鍋。將放氣閥打開,放氣5—10 min,以排除鍋內(nèi)的冷空氣。

            ③待鍋內(nèi)水沸騰后,落下放氣閥繼續(xù)升溫升壓,玻璃器皿等用15磅(121℃)30 min,膠塞、塑料制品、溶液等可用10磅(115 ℃)20 min。調(diào)節(jié)火力大小保持該壓力。

            ④停止加熱,待壓力自然下降至0再打開放氣閥排汽,開蓋,取出高壓滅菌的物品烘干。

            電熱自動滅菌鍋使用說明(型號:SANYO Autoclave MLS-3020):

            ①放氣筒加水至LOW水平線處,轉(zhuǎn)化細胞將與高壓鍋相連的導(dǎo)氣管插入放氣筒里,然后將放氣筒歸于原位。

            ②打開高壓鍋蓋,加入蒸餾水至高壓鍋底的水位線,水位線位于V型凹槽的1/3-2/3處。

            ③打開電源。

            ④設(shè)定高壓溫度及時間,高壓鍋的溫度范圍為105-121℃,高壓滅菌一般采用121℃20—30 min。

            ⑤把待高壓的物品置于高壓鍋內(nèi),順時針方向?qū)xhaust鈕旋至close位置。

            ⑥關(guān)閉高壓鍋蓋,旋至顯示屏上左上角的紅亮點剛出現(xiàn)為止。

            ⑦按start鈕,開始高壓,在溫度達80℃時顯示器開始顯示溫度,當溫度達到所需的設(shè)定溫度時,在顯示屏的左下角有一長形的指示燈閃亮,直到高壓時間結(jié)束后指示燈滅,此時蜂鳴器報警一聲。當壓力降至0 MPa時,蜂鳴器再報警一聲。溫度降至80℃時,蜂鳴器報警10次。顯示屏溫度指示消失,此時才可打開鍋蓋。

            ⑧關(guān)電源,開高壓鍋蓋,取出已滅菌的物品,烘干。

            (4)濾過除菌 用于培養(yǎng)用液和各種不能高壓滅菌的溶液的滅菌。采用金屬濾器和小型的塑料濾器,配上可以更換的微孔濾膜,極大地方便了操作。濾器型號按直徑大小劃分。如過濾量大的培養(yǎng)用液常用較大型號的金屬濾器(直徑90 mm、100 mm、142 mm……等),配以過濾泵使用。過濾量較小的液體常用注射器推動的塑料小濾器(直徑20 mm、25 mm等)。濾膜孔徑有0.60 μm、0.45 μm、0.35 μm、0.22 μm、0.10μm等,以0.22 μm除菌zui為保險,但對于較粘稠難濾過的液體,仍需選用孔徑較大的濾膜。

            ①在過濾器上裝上微孔濾膜,孔徑為0.22μm。

            轉(zhuǎn)化細胞用布包好,濕熱滅菌后使用。

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