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            上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第10年

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            ATCC細(xì)胞
            蛋白質(zhì)產(chǎn)品
            核酸擴(kuò)增產(chǎn)品
            elisa試劑盒
            生化試劑
            PCR試劑盒
            標(biāo)準(zhǔn)品
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            生化試劑盒
            科研細(xì)胞
            分子生物學(xué)試劑
            ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)
            蛋白
            抗體

            腫瘤細(xì)胞分離中需要注意的幾個(gè)問題

            時(shí)間:2017/3/2閱讀:1991
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            1.如果您要做腫瘤細(xì)胞培養(yǎng),記住實(shí)驗(yàn)中所用的試劑(分離液,洗滌液等)、器械等都要是無菌消毒的,并注意實(shí)驗(yàn)中的無菌操作。

            2. 離心轉(zhuǎn)速單位及時(shí)間:目前國(guó)外的文獻(xiàn)報(bào)道基本上用g為單位,注意g和轉(zhuǎn)速(rpm)的換算。

            3.離心溫度:有的要求室溫,有的要求4攝氏度。實(shí)驗(yàn)的操作要求盡可能熟練,連貫。

            4.在用Ficoll分離單個(gè)核腫瘤細(xì)胞(PBMC)時(shí),通常含有少量的紅細(xì)胞,對(duì)于一般的實(shí)驗(yàn)影響不大,如果實(shí)驗(yàn)要求較高,可采取裂解液(有的需要無菌),并注意裂解時(shí)間控制,以免影響單個(gè)核細(xì)胞的活性。

            5. 在用Percoll配不連續(xù)梯度時(shí)(一般用高滲NaCl),注意各成份體積的準(zhǔn)確性,否則密度與預(yù)期的不一樣,影響分離效果。

            6.用全血離心效果比全血稀釋后再離心效果差,稀釋一般等體積稀釋一倍。

            7.分離液與樣本的體積比:一般應(yīng)小于1:2(即一般為1體積分離液,2體積樣本,不宜超過2體積,小于2體積均可)

            8.洗滌液的成分:不同文獻(xiàn)報(bào)道不一,有的使用PBS,有的為Hank’s,KRP等,可自己選定。主要是離子濃度及成份的不同,有的含有Mg2+,Ca2+。

            9.腫瘤細(xì)胞活性:0.2%臺(tái)盼藍(lán)染色3-5分鐘,鏡下觀察計(jì)數(shù)死亡細(xì)胞(藍(lán)染)。

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